[发明专利]一种具有中央灌流系统的活体神经支架及其制造方法

权利要求书

1.一种用于制造活体神经支架的模具，所述活体神经支架包括三维培养制作而成的神经细胞束，所述神经细胞束为具有灌流通道的管腔结构，并且所述灌流通道内修饰有内皮细胞层，其特征在于，所述模具包括：第一定位板、下安装板、上安装板和针；

所述第一定位板有两个，其分别设置有一定数量个用于安装所述针的第一孔；

所述下安装板和所述上安装板能够装配在一起，形成一定数量个管腔，并且在所述管腔的两端形成能够与所述第一定位板配合的表面；由此，使得所述下安装板和所述上安装板放置于两个所述第一定位板之间时，所述第一孔与所述管腔的轴线对齐；

所述上安装板和所述下安装板与两端的所述第一定位板可拆卸地连接；

所述模具还包括第二定位板和毛细玻璃管；

所述第二定位板有两个，其上分别设置有一定数量个用于安装所述毛细玻璃管的第二孔；

所述下安装板和所述上安装板放置于两个所述第二定位板之间时，所述第二孔与所述管腔的轴线对齐；

所述毛细玻璃管能够在所述管腔内滑动。

2.根据权利要求1所述的模具，其特征在于，所述下安装板具有平行于所述管腔的第一表面，并且在所述第一表面上设置有一定数量个第一沟槽；所述上安装板具有平行于所述管腔的第二表面，并且在所述第二表面上设置有一定数量个第二沟槽；所述下安装板嵌入所述上安装板时，所述第一表面能够与所述第二表面接触，从而使所述第一沟槽和所述第二沟槽形成所述管腔。

3.一种使用根据权利要求1或2所述的模具制备活体神经支架的方法，包括如下步骤：

步骤1，使用第一定位板、下安装板、上安装板和针制作第一装配体，在所述第一装配体中制作用于为神经干细胞线提供三维线性化生长环境的琼脂糖导管；

步骤2，移除所述第一装配体中的第一定位板和针，装配第二定位板和毛细玻璃管得到第二装配体，在所述琼脂糖导管的管腔内对神经干细胞三维培养，制作包裹神经干细胞的水凝胶，所述包裹神经干细胞的水凝胶为具有内部通道的管腔结构；

步骤3，在所述内部通道的内壁上修饰一层内皮细胞层；

步骤4，将营养液通入所述包裹神经干细胞的水凝胶，在长期灌流培养的条件下，培养至神经干细胞线性生长为束状结构的神经束；

步骤5，将所述神经束从所述琼脂糖导管中剥离，得到活体神经支架。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1进一步包括：

称取琼脂糖粉末，溶解于去离子水中，得到琼脂糖溶液；

在烧杯内加入磁力搅拌子，加热至琼脂糖溶液沸腾；

将沸腾的琼脂糖溶液静置待气泡消失后，倒入模具中，静置直到琼脂糖溶液冷却至室温，得到结构稳定的琼脂糖导管。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2进一步包括：

配置GelMA水凝胶原液；

进行神经干细胞的培养及传代；

将传代后的神经干细胞做离心处理，去掉培养液，并向离心后的神经干细胞中加入经由微孔过滤膜过滤之后的GelMA水凝胶原液，吹散神经干细胞，使所述神经干细胞均匀分布在GelMA原液中；

取包裹有神经干细胞的GelMA原液，缓慢加入所述琼脂糖导管的管腔中；

从所述第二定位板的第二孔插入毛细玻璃管，利用光交联法，使用紫外灯照射琼脂糖导管得到包裹有神经干细胞的水凝胶。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤3进一步包括：

取下第二定位板，打开下安装板和上安装板，取出填充有所述包裹有神经干细胞的水凝胶的琼脂糖导管；

抽出所述毛细玻璃管一定长度，将嵌有所述毛细玻璃管的琼脂糖导管置于培养皿中；

将内皮细胞悬浮液注射进所述毛细玻璃管内，使内皮细胞在所述包裹有神经干细胞的水凝胶的内部通道表面贴壁生长；

待内皮细胞生长，得到贴壁生长的内皮细胞层。