[发明专利]二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器及检测方法

说明书

本发明涉及二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器及检测方法。二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器，包括单独存放的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体、酶标条、包被酶标条用二乙酸镳草镰刀菌烯醇‑半谷氨酸‑乳清蛋白偶联物、过氧化氢溶液、表面修饰羊抗鼠抗体的铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子和用于检测气压的气压检测传感器；所述抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞菌株DAS5G11E7产生。该方法具有灵敏度高、便携、廉价和易于操作等优点。

技术领域

本发明涉及二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器及利用其检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇含量的方法。

背景技术

二乙酸镳草镰刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol,DAS)又名蛇形毒素，属于单端孢霉烯毒素的一种，主要由梨孢镰孢霉、木贼镰孢霉和镳草镰孢霉等镰孢霉代谢所生。其主要污染谷物和饲料，其毒性较高，损害人类及动物骨髓等造血器官、脑与中枢神经细胞变性、淋巴结、睾丸与胸腺等。因此蛇形毒素污染是威胁农产品质量安全及农业产业发展的重大风险隐患。农产品生产涉及环节多，霉菌毒素污染不可避免，我国已对食品中的主要真菌毒素做了限量规定，但对于蛇形毒素并未做出限定。从而增加了农产品质量安全风险隐患。

现有二乙酸镳草镰刀菌烯醇的检测方法主要是基于高效液相色谱等大型仪器的实验室确证性检测技术，样品处理复杂，不便于现场检测等不足。免疫学检测法是基于抗原-抗体特异性识别，通过酶、荧光等标记技术加以放大，从而定性或定量显示靶标物的含量。此类方法具有样品处理简单、灵敏度高、特异性强、实验周期短、适用于现场检测等优点。

发明内容

针对目前现有技术的不足，提供一种检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇含量的二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器及检测方法。

提供一种二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器，包括单独存放的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体、酶标条、包被酶标条用二乙酸镳草镰刀菌烯醇-半谷氨酸-乳清蛋白偶联物、过氧化氢溶液、表面修饰羊抗鼠抗体的铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子和用于检测气压的气压检测传感器；所述抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞菌株DAS5G11E7产生。

按上述方案，所述的金核铂壳纳米粒子粒径在10-150nm。

按上述方案，所述的竞争型气压免疫传感器还包括橡胶条和放置酶标条的金属容器，金属容器上设有气压检测孔，酶标条放置于金属容器中，然后用橡胶条密封后，利用气压检测传感器检测体系压力。

按上述方案，所述修饰羊抗鼠抗体的铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子的制备方法：将抗小鼠二抗添加到铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子中混匀，孵育一段时间后，加入封闭液封闭，获得表面修饰羊抗鼠抗体的铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子。封闭后的溶液离心去上清，用含有2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸的缓冲液保存培养，4℃贮存备用。

按上述方案，羊抗鼠抗体修饰金核铂壳纳米粒子的时间为6-12h。

按上述方案，羊抗鼠抗体的浓度范围为1-32μg/mL。

一种利用上述二乙酸镳草镰刀菌烯醇竞争型气压免疫传感器检测抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇含量的方法，包括以下步骤：

将包被有二乙酸镳草镰刀菌烯醇-半谷氨酸-乳清蛋白偶联物的酶标条加入样品提取液和抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体溶液，孵育，所述抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞菌株DAS5G11E7产生；

加入经过羊抗鼠抗体的铂纳米粒子或金核铂壳纳米粒子溶液，孵育，后处理；