[发明专利]人T细胞的培养方法及无血清培养基组合

说明书

本发明涉及一种人T细胞无血清培养基及其配制方法，所述培养基的成分中含有：L‑Glutamine、F‑68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、IGF‑I、亚油酸、吡哆胺二盐酸盐。本发明人T细胞无血清培养基组合培养得到的人T细胞在细胞总数、增殖速度、扩增倍数和对肿瘤细胞的杀伤活性等方面都优于现有技术，满足临床治疗所需。本发明人T细胞无血清培养基组合的三种培养基中使用相同的基础培养基，便于人T细胞无血清培养基组合的大量配制；基础培养基及各组分均不含动物血清，有效规避了由动物血清对接受细胞治疗患者带来的风险以及动物血清中不确定的成分对细胞培养的结果造成影响。本发明在基础培养基中加入了刀豆蛋白A和补体调节蛋白以及白介素因子。配合分阶段进行细胞培养的方法，大大提高了T细胞得率，增加了T细胞培养的终密度，从而降低了细胞培养的成本。

技术领域

本发明属于生物培养领域，具体涉及一种支持人T细胞的培养方法及无血清培养基组合。

背景技术

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞(胚胎期则来源于卵黄囊和肝)。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

现有的细胞免疫治疗中的T细胞主要是通过分离血液中的淋巴细胞，经体外培养、各种细胞因子刺激诱导扩增培养，得到一定量的细胞后回输人体，进行肿瘤治疗。现有 T细胞的培养基主要是由基础培养基、自体血浆(或动物血清)和各种因子培养组成，培养得到的T细胞增殖倍数有限、数量不多，不能广泛的用于治疗，限制了T细胞在免疫细胞治疗中的应用。

所以，T细胞无血清培养基的研究成为免疫细胞治疗中一个重要的突破点，人们开始尝试用含有多种氨基酸、无机盐、维生素和细胞因子的培养基培养T细胞。

现有技术中虽然对T细胞的培养基进行了较大改进，但是使用现有培养基和培养方法获得的T细胞的细胞数量、细胞活率和杀伤活性等仍有待进一步提高，无法满足临床治疗对T细胞的应用要求。

因此急需提供一种化学成分明确，污染风险小，细胞培养效果好，适用于工业规模生产的支持人T细胞高密度悬浮培养的无血清培养基。

发明内容

本发明提供的人T细胞无血清培养基更适合高效培养T细胞，提高增值倍数。

本发明的第一个目的在于提供一种能更高效的扩增和活化T细胞的培养基组合，使获得的T细胞的数量更多、增殖倍数更高和杀伤效果更佳。

本发明的第二个目的在于提供一种人T细胞的培养方法。本发明的第一个目的通过以下技术方案予以实现：

一种人T细胞无血清培养基组合，包括基础培养基、增殖培养基和活化培养基，所述诱导培养基包括基础培养基和诱导组分，所述增殖培养基包括基础培养基和增殖组分，所述活化培养基包括基础培养基和活化组分。