[发明专利]人T细胞的培养方法及无血清培养基组合在审
申请号: | 201911109556.3 | 申请日: | 2019-11-13 |
公开(公告)号: | CN112795536A | 公开(公告)日: | 2021-05-14 |
发明(设计)人: | 贾萌萌;潘韵芝;朱国强 | 申请(专利权)人: | 苏州易迈吉生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0783 | 分类号: | C12N5/0783;C12N5/02 |
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地址: | 215152 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 细胞 培养 方法 血清 培养基 组合 | ||
1.一种人T细胞无血清培养基组合,包括基础培养基、增殖培养基和活化培养基,所述诱导培养基包括基础培养基和诱导组分,所述增殖培养基包括基础培养基和增殖组分,所述活化培养基包括基础培养基和活化组分。
所述基础培养基包括下述含量的下述组分:L-精氨酸220-320mg/L,L-门冬酰胺30-60mg/L,L-胱氨酸二盐酸盐50.15-80.15mg/L,L-谷氨酸15-35mg/L,甘氨酸8-12mg/L,L-组氨酸13-16mg/L,L-羟脯氨酸18-22mg/L,L-异亮氨酸35-50mg/L,L-亮氨酸40-60mg/L,L-赖氨酸盐酸盐30-50mg/L,L-甲硫氨酸12-18mg/L,L-苯丙氨酸12-18mg/L,L-脯氨酸18-22mg/L,L-丝氨酸25-30mg/L,L-苏氨酸9-22mg/L,L-色氨酸2-16mg/L,L-酪氨酸20.5-25.5mg/L,L-缬氨酸18-22mg/L,神经细胞生长因子0.5-60ng/mL,L-门冬氨酸12-25mg/L,无水氯化钙28-32mg/L,氯化钾300-500mg/L,氯化钠4000-6000mg/L,葡萄糖1800-2200mg/L,还原谷胱甘肽0.7-1.2mg/L,维生素B12 0.003-0.08mg/L,L-谷氨酰胺200-400mg/L,生物素0.2-0.5mg/L,次黄嘌呤3-5mg/L,叶酸0.8-1mg/L,肌醇32-36mg/L,烟酰胺0.8-1.4mg/L,氯化胆碱2.5-3.2mg/L,盐酸吡哆醇0.8-1.2mg/L,核黄素0.2-0.4mg/L,盐酸硫胺素0.8-1mg/L,表皮细胞生长因子0.5-50ng/mL,卵泡刺激因子80-100ng/mL,刀豆蛋白10-30mg/L,补体调节蛋白1-10mg/L。
2.根据权利要求1所述的人T细胞无血清培养基,其特征在于,所述基础培养基包括下述含量的下述组分:L-精氨酸260mg/L,L-门冬酰胺50mg/L,L-胱氨酸二盐酸盐65.15mg/L,L-谷氨酸25mg/L,甘氨酸10mg/L,L-组氨酸15mg/L,L-羟脯氨酸20mg/L,L-异亮氨酸50mg/L,L-亮氨酸50mg/L,L-赖氨酸盐酸盐40mg/L,L-甲硫氨酸15mg/L,L-苯丙氨酸15mg/L,L-脯氨酸20mg/L,L-丝氨酸30mg/L,L-苏氨酸20mg/L,L-色氨酸5mg/L,L-酪氨酸23.19mg/L,L-缬氨酸20mg/L,神经细胞生长因子5ng/mL,L-门冬氨酸20mg/L,无水氯化钙30mg/L,氯化钾400mg/L,氯化钠6000mg/L,葡萄糖2000mg/L,还原谷胱甘肽1mg/L,维生素B12 0.005mg/L,L-谷氨酰胺300mg/L,生物素0.2mg/L,次黄嘌呤4mg/L,叶酸1mg/L,i-肌醇35mg/L,烟酰胺1mg/L,氯化胆碱3mg/L,盐酸吡哆醇1mg/L,核黄素0.2mg/L,盐酸硫胺素1mg/L,表皮细胞生长因子5ng/mL,卵泡刺激因子60ng/mL,刀豆蛋白20mg/L,补体调节蛋白5mg/L。
3.根据权利要求1-2所述的人T细胞无血清培养基组合,其特征在于,诱导组分及含量为:OKT-3单克隆抗体10-90μg/L,白细胞介素-2(IL-2)10-150μg/L,白细胞介素-12(IL-12)10-150μg/L,白细胞介素-15(IL-15)10-200μg/L,白细胞介素-18(IL-18)10-90μg/L,白细胞介素-21(IL-21)10-150μg/L。
增殖组分及含量为:白细胞介素-2 10-400μg/L,白细胞介素-15 10-400μg/L,白细胞介素-18 10-500μg/L,CD16单克隆抗体10-400μg/L。更优选地,所述增殖组分及含量为:白细胞介素-2 50μg/L,白细胞介素-15 30μg/L,白细胞介素-18 50μg/L,CD16单克隆抗体30μg/L。
活化组分及含量为:白细胞介素-2 10-150μg/L,白细胞介素-15 10-150μg/L,INF-r10-120μg/L,TNF-α 10-200μg/L,白细胞调节素(LR)10-90μg/L。更优选地,所述活化组分及含量为:白细胞介素-2 30μg/L,白细胞介素-1 30μg/L,INF-r 30μg/L,TNF-α 80μg/L,白细胞调节素80μg/L。
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