[发明专利]一种预防烤烟青枯病的生物菌肥、制备方法及应用

权利要求书

1.一种预防烤烟青枯病的生物菌肥，其特征在于，由生物菌肥种子菌发酵液和米糠组成；所述生物菌肥种子菌发酵液与米糠的质量比为1：3～8。

2.根据权利要求1所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥，其特征在于，所述生物菌肥种子菌发酵液与米糠的质量比为1：5。

3.根据权利要求1或2所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥，其特征在于，所述生物菌肥种子菌发酵液中，按体积百分比，由以下组分组成：枯草芽孢杆菌5～20％、短小芽孢杆菌5～20％、侧孢芽孢杆菌5～20％、巨大芽孢杆菌5～20％、解淀粉芽孢杆菌5～15％、酵素5～10％、米曲霉5～10％、康氏木霉5～10％。

4.根据权利要求3所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥，其特征在于，所述生物菌肥种子菌发酵液中，按体积百分比，由以下组分组成：枯草芽孢杆菌10～20％、短小芽孢杆菌10～20％、侧孢芽孢杆菌10～20％、巨大芽孢杆菌5～20％、解淀粉芽孢杆菌10～15％、酵素5％、米曲霉5～10％、康氏木霉5％。

5.根据权利要求3所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥，其特征在于，所述生物菌肥种子菌发酵液中，按体积百分比，由以下组分组成：枯草芽孢杆菌10～20％、短小芽孢杆菌10～20％、侧孢芽孢杆菌10～20％、巨大芽孢杆菌10～20％、解淀粉芽孢杆菌10～15％、酵素5％、米曲霉5％、康氏木霉5％。

6.上述权利要求1至5中任一项预防烤烟青枯病的生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、分别将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、酵素、米曲霉、康氏木霉的种子菌发酵液按照设定的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液；

S2、将粉碎过的米糠过筛，干热灭菌第一设定时间后，得到完全灭菌的米糠；在无菌条件下，将生物菌肥种子菌发酵液和米糠，按照质量比1：3～8的比例进行均匀混合后转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵第二设定时间；

S3、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥条件下风干，当含水率≤12％时，制得预防烤烟青枯病的生物菌肥。

7.根据权利要求6所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述种子菌发酵液有效菌含量均在3×10⁸cfu/mL以上。

8.根据权利要求6所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述种子菌发酵液的制备方法，包括以下步骤：

1)培养基的制备

牛肉膏蛋白胨固体培养基的组成：牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂及蒸馏水；

营养肉汤培养基的组成：牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖及蒸馏水；

肉汤培养基的组成：胰蛋白胨、酵母提取物及氯化钠；

马铃薯葡萄糖琼脂培养基的组成：去皮马铃薯、葡萄糖、琼脂及蒸馏水；

2)将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌分别接入牛肉膏蛋白胨固体培养基中，置摇床上30℃，200r/min，培养72小时，将温度升高至36℃、200r/min，4-5h，使它们形成芽孢；

待培养基上长满菌丝再将其分别接种到肉汤培养基中，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，制成菌含量在3×10⁸cfu/mL的菌悬液A；

将康氏木霉和米曲霉接入于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，30℃培养3天，滴加无菌水，振荡制备菌悬液，制成菌含量在3×10⁸cfu/mL的菌悬液B；

3)将制成的菌悬液A和菌悬液B分别接入到营养肉汤培养基中，在30℃的恒温摇床，以200r/min中培养48小时，得到种子菌发酵液。

9.上述权利要求1至5中任一项预防烤烟青枯病的生物菌肥的应用，其特征在于，所述生物菌肥应用于植烟土壤。

10.根据权利要求9所述的预防烤烟青枯病的生物菌肥的应用，其特征在于，还包括有机肥，所述生物菌肥与所述有机肥的质量比为1：3～8。