[发明专利]一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒

说明书

本发明提供一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒，该试剂盒以免疫磁珠为载体，经过化学反应，使免疫磁珠上偶联有黄曲霉毒素单克隆抗体和赭曲霉毒素单克隆载体。本发明可能够与样品中的黄曲霉毒素、赭曲霉毒素实现特异性结合，利用免疫磁珠在液体中均匀分散快速，可以缩短免疫反应时间，可广泛应用于饲料、粮油制品等产品中黄曲霉毒素的富集与分离，从而能够提高检测的灵敏度，避免漏检的现象；同时减少了大量的有机溶剂的使用。

技术领域

本发明属于一种食品安全检测分析领域，具体涉及一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒。

背景技术

免疫磁珠是免疫学和磁性载体技术结合而成的纳米级材料，其表面为带有氨基、羧基、羟基或巯基等化学官能团的磁珠。包被抗体的免疫磁珠作为固相载体，其表面的抗体与相应抗原发生特异性结合形成抗原-抗体-磁珠复合物，这种复合物在磁场作用下，迅速向磁场移动，使复合物与其他物质分离，达到分离目的。

在粮食、饲料等农产品的生产、加工、运输等过程中，受到温度、湿度等影响，为毒素的生产繁殖提供了有力的契机，我国每年有大量农作物因真菌毒素污染严重而失去使用价值，黄曲霉毒素是一类结构类似的化合物，自然界中的黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌和寄生曲霉产生的次级代谢产物。赭曲霉毒素是曲霉素和青霉素的真菌形成的次级代谢产物。研究表明摄入了被这种毒素污染的农产品后，会发生急性或慢性中毒症，能对人及动物的肝脏组织产生破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。因而防止污染黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的检测十分重要。

然后由于待测物组分的复杂性、待测浓度低、前处理提取技术等因素，现有的黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的同时提取工艺并不完善，造成提取黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的富集效率低等，降低了检测分析的灵敏度和特异性。

发明内容

本发明目的是为了提供一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒，用于样本中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的复合富集和净化，以解决当前样品净化分离操作复杂、分离效率低的等技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒，其以免疫磁珠为载体，经过化学反应活化，使得磁珠表面带有亲和配基，活化后磁珠与黄曲霉毒素抗体和赭曲霉毒素抗体偶联，制得能够对黄曲霉毒素、赭曲霉毒素实现快速富集和纯化的样本前处理试剂盒，以便后续HPLC或酶联免疫吸附法的测量。

优选地，所述试剂盒的具体步骤如下（S1）:将偶联有黄曲霉毒素抗体、赭曲霉毒素抗体的免疫磁珠从冰箱中取出恢复至室温，旋转混匀，将预先处理的样本溶液放入试管中，后将免疫磁珠转移至试管中，充分旋转重悬，室温下旋转捕获20min，以实现最大程度地捕获样本中的黄曲霉毒素和赭曲霉毒素，利用磁架进行磁分离，缓慢弃去上清液；将已捕获过样本的免疫磁珠利用清洗液清洗数次，轻摇重悬磁分离；已实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的样本富集净化；（S2）:将步骤S1中得到的免疫磁珠洗脱液进行洗脱，室温震荡几秒钟，磁分离，上清液即为待测的黄曲霉毒素和赭曲霉毒素样本，可用于后续的HPLC测定。

优选地，每个免疫磁珠净化试剂盒中所含抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗赭曲霉毒素单克隆抗体分别为：0.4mg-1mg和0.5mg-1.5mg。

优选地，免疫磁珠浓度为10-60mg/mL。

优选地，缓冲液为pH7.4，0.02mo1/L的含甲醇10%的PBS缓冲液。

本发明提供的一种黄曲霉毒素、赭曲霉毒素的复合免疫磁珠净化试剂盒具体制备方法为：

（1）抗体预处理：将已纯化好的抗黄曲霉毒素单克隆抗体及抗赭曲霉毒素抗体置于pH6.5 50mmol/L缓冲液透析过夜12h；