[发明专利]一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用，属于水产疾病防治技术领域。一种淡水鱼类细菌病快速检测药敏试剂盒，包括TSA培养基、增菌液和渔类抗菌药纸片。基于所述试剂盒检测淡水鱼类细菌病药敏的方法包括：病样组织液的提取、细菌扩增、细菌接种培养和结果判断。本发明提供的试剂盒能快速筛选出对病原菌敏感的渔用药物，及时指导养殖户高效用药，提高用药治疗效果；检测方法简单方便；对实验技能要求不高，临床应用性强，同时还可实现耐药菌株的分离。

技术领域

本发明属于水产疾病防治技术领域，具体涉及一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用。

背景技术

我国是世界水产养殖大国，也是水产品贸易大国，水产品产量占世界的70％，出口额连续6年居世界首位。但近年来，由于水产养殖业的快速发展，细菌性疾病时有发生，处理不当，可造成较大的经济损失。目前，细菌病治疗最有效的是抗生素，但是近年来药物治疗效果不显著并出现反复发作的现象，原因可能与引起细菌病不同种类细菌有关，另外可能由于抗生素的频繁和不规范使用，引起抗生素耐药性、抗药性和药物残留等问题，特别是药物残留问题会直接影响我国水产品出口贸易。因此，很有必要在使用药物治疗前，进行药敏试验，快速筛选出高效的治疗药物。然而，目前市场上只有针对人源细菌或哺乳动物源细菌相关的药敏试剂盒，而没有专门针对水产动物源细菌使用的产品；也有一些学者针对水产动物源细菌药敏试剂盒开展研究，但仍存在使用繁杂，环境条件要求高，用时长，抗生素品种与渔药产品脱节等问题，且只停留在研究阶段，尚未达到推广和应用；另外渔药市场上的抗生素产品种类繁多、含量与成分不明，还可能存在鱼目混珠的情况。因此急需一种科学、快速和贴合实际的用药指导，指导养殖户及时、准确和高效地使用抗生素类药物治疗，减少抗生素的使用，减少养殖户经济损失。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒及其应用，所述试剂盒能快速、准确、实用方便的检测鱼病样的的渔药敏感性，及时指导养殖户科学用药。

本发明提供了一种淡水鱼类细菌病药敏检测试剂盒，包括以下组成：

TSA培养基、渔类抗菌药的药敏纸片和增菌液。

优选的，所述渔类抗菌药的药敏纸片包括氟苯尼考的药敏纸片、磺胺异恶唑的药敏纸片、阿莫西林的药敏纸片、恩诺沙星的药敏纸片、盐酸新霉素的药敏纸片、链霉素的药敏纸片、诺氟沙星的药敏纸片和强力霉素的药敏纸片中的一种或几种。

优选的，所述增菌液以TSB培养基为基础培养基，还包括体积浓度9％～11％的鱼血清和0.02％～0.04％的阿尔玛蓝溶液指示剂。

优选的，还包括滴管、封口胶和用于盛装TSA培养基的培养皿。

优选的，所述培养皿的直径为90mm。

本发明提供了所述检测试剂盒在筛选治疗淡水鱼类细菌病的抗生素或筛选耐抗生素的菌株中的应用。

本发明提供了一种基于所述检测试剂盒快速检测淡水鱼类细菌病药敏的方法，包括以下步骤：

1)取患细菌病淡水鱼的肝脏，剪碎，得到的肝脏糜与增菌液混合，静置，待混合液变淡红色后，取2～3滴混合液滴入TSA培养基上，涂布，得到涂布有混合液的TSA培养基；

2)取渔类抗菌药的药敏纸片置于所述涂布有混合液的TSA培养基上，压平所述药敏纸片后密封；

3)将密封后的TSA培养基置于37℃条件下恒温培养12～24h，观察细菌生长情况，测定药敏纸片周围的无菌圈直径，根据美国CLSI判断标准进行药敏程度判读。

优选的，步骤1)中所述静置的时间为4～6h。

优选的，步骤1)中涂布后，还包括将涂布有混合液的TSA培养基静置5～6min晾干水分。