[发明专利]一种用核酸适配体磁珠检测甲胎蛋白的方法

说明书

本发明提供了一种用于非疾病诊断目的的用核酸适配体磁珠定量检测甲胎蛋白的方法，属于分子生物学技术领域。本发明所述方法利用核酸适配体磁珠与待测样品稀释液混合孵育，得到反应液；然后用磁分离装置将反应液中的磁珠分离出来，得到吸附有甲胎蛋白的磁珠；再用洗脱液洗脱磁珠上的甲胎蛋白，得到待测液；最后测定待测液中的甲胎蛋白含量，计算得到待测样品中的甲胎蛋白浓度。本发明提供的方法操作简便、实用性强。利用本发明提供的方法对甲胎蛋白进行定量检测，有助于促进甲胎蛋白生理调节机制的研究。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种用于非疾病诊断目的的用核酸适配体磁珠定量检测甲胎蛋白的方法。

背景技术

核酸适配体(Aptamer)是一类具有特异性识别功能的单链DNA或者RNA核酸分子，碱基数一般在20～100之间，通常又被称为“化学抗体”。其作用本质是核酸分子折叠形成特定三维结构而与生物靶标特异性地结合，具有高亲和力和高特异性，

适配体一般在体外通过指数级富集配体系统进化技术(SELEX)筛选得到，可逆变性与复性，可通过酶扩增、剪切。另外，适配体具有价格便宜，化学稳定性好等优点，在生物医学领域具有广阔的应用前景。

甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白，属于白蛋白家族，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成。甲胎蛋白在胎儿血液循环中具有较高的浓度，出生后则下降，至生后2～3月，甲胎蛋白基本被白蛋白替代，血液中较难检出，故在成人血清中含量极低。甲胎蛋白具有很多重要的生理功能，包括运输功能、作为生长调节因子的双向调节功能、免疫抑制、T淋巴细胞诱导凋亡等。对甲胎蛋白的定量检测对于生理调节机制的研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于非疾病诊断目的的用核酸适配体磁珠定量检测甲胎蛋白的方法，操作简便、实用性强。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种用于非疾病诊断目的的通过核酸适配体定量检测甲胎蛋白的方法，包括如下步骤：

(1)将甲胎蛋白核酸适配体与磁珠混合孵育，得到适配体磁珠；

(2)将待测样品与稀释液混合，得到待测样品稀释液；

(3)将所述核酸适配体磁珠与所述待测样品稀释液混合孵育，得到反应液；

(4)用磁分离装置将反应液中的磁珠分离出来，得到吸附有甲胎蛋白的磁珠；

(5)用洗脱液洗脱步骤(4)所述磁珠上的甲胎蛋白，得到待测液；

(6)测定所述待测液中的甲胎蛋白含量，计算得到待测样品中的甲胎蛋白浓度；

所述步骤(1)与(2)不存在时间先后的限定；

所述甲胎蛋白核酸适配体的序列为：

5’-GTGACGCTCCTAACGCTGACTCAGGTGCAGTTCTCGACTCGGTCTTGATGTGGGTCCTGTCCGTCCGAACCAATC-3’(SEQ ID No.1)。

所述磁珠的粒径为50～500nm。

优选的，步骤(1)所述混合孵育的温度为36～38℃，时间为60～240min。

优选的，步骤(2)所述稀释液为pH值7.5的Tris-HCl缓冲液。

优选的，所述待测样品与所述稀释液的混合体积比例为1：(8～12)。

优选的，步骤(3)所述混合孵育的温度为36～38℃，时间为60～240min。

优选的，步骤(5)所述洗脱液为TE缓冲液。

优选的，步骤(6)所述测定的方法为高效液相色谱法。