[发明专利]一种合成L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的方法

说明书

本发明属于生化合成技术领域，具体公开了一种合成L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的方法。该合成方法采用5,6‑O‑异丙叉基‑L‑抗坏血酸为起始原料，先反应制得5,6‑O‑异丙叉基‑L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷，反应得到的反应液用强酸性阳离子交换树脂进行分离，5,6‑O‑异丙叉基‑L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷即可水解为L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷，然后再进行结晶、干燥，即得到L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷产品，结晶后剩余的料液循环使用。本发明的合成方法有效避免了副产物生成，降低了后续分离纯化难度，提高了L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷产品的纯度和收率。

技术领域

本发明涉及生化合成技术领域，特别是涉及一种合成L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的方法。

背景技术

L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷(也即2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸)的结构式见式(Ⅰ)所示，L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷作为L-抗坏血酸重要的衍生物，是卫生署公布认可的美白添加剂之一，是公认最为稳定的L-抗坏血酸衍生物。L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷是目前各大品牌化妆品产品中最常使用的美白成分。L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷不仅具有良好的美白效果，而且化学性质稳定、对皮肤无刺激，因此在国内外化妆品生产中被广泛使用。进入人体细胞的L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷经α-葡萄糖苷酶水解生成抗坏血酸和葡萄糖，因此L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷具有与抗坏血酸一样的还原性和抗氧化性，L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的持续分解可为体内不断提供抗坏血酸。

目前已报道的关于L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的制备方法，采用的起始原料均为抗坏血酸或其盐类。申请号为201010571709.9的专利文件中公开了一种含2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸无水结晶粉末的制造方法，含有淀粉和L-抗坏血酸的溶液经环麦芽糖糊精葡聚糖转移酶和葡萄糖淀粉酶的依次作用，得到2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸生产率为35％以上的溶液。申请号为201610985353.0的专利申请中也公开了一种制备L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的方法，采用重组蔗糖磷酸化酶的大肠杆菌工程菌株发酵生产得到的蔗糖磷酸化酶为生物催化剂，以蔗糖为糖基供体，L-抗坏血酸为糖基受体，进行生物催化制备L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷产品。在该专利中还进一步指出，目前以抗坏血酸或其盐类为原料的制备方法，在L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的制备过程中会生成10％左右的5-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸和6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸混合副产物，原因是由于葡萄糖基供体在糖基转移酶的作用下不仅与L-抗坏血酸的2位羟基反应，还能与其5位和6位羟基反应，因此不可避免的生成了5-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸和6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸副产物。这两种副产物的分子量与目标产物L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷相同，因此纯化时很难将副产物分离，导致目标产物L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷难以从过饱和溶液中结晶析出。该专利针对该缺陷进行了改进，构建重组蔗糖磷酸化酶的工程菌株，以发酵所得菌体细胞为生物催化剂，在柠檬酸三钠缓冲液体系中，以蔗糖和L-抗坏血酸为原料制备L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷，经实验验证反应产物主要为L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷。

本发明拟寻找一种新型反应底物作为起始物料来合成L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷，以减少副产物的生成。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的合成方法，分离纯化简单，L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷产品的纯度和收率高。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：一种合成L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：

(1)以5,6-O-异丙叉基-L-抗坏血酸为反应原料，添加葡萄糖基供体，在糖基转移酶作用下进行生物转化反应；

(2)向步骤(1)反应结束后得到的反应液中加入葡萄糖淀粉酶进行水解反应，制备5,6-O-异丙叉基-L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷；