[发明专利]一种NK细胞的体外扩增培养方法

说明书

本发明公开了一种NK细胞体的外扩增培养方法。该方法包括以下步骤：(1)向处理后包含NK细胞的血液中加入刺激因子和终浓度为0.1～10nM的比例调节剂，培养3～4天；(2)调整细胞密度为0.5～1.5×10⁶个/mL后，再继续添加终比例调节剂和细胞因子，继续培养20～30天即可。本发明在培养NK细胞的过程中，无异体细胞，所涉及因子均为临床级别对人体无害的因子，安全性能强，培育得到的细胞表型和数量稳定，培育方法简便可行。

技术领域

本发明属于细胞培育技术领域，具体涉及一种NK细胞的体外扩增培养方 法。

背景技术

随着医学的进步，癌症患者的生存率得到明显改善，但目前仍然还是难治 性疾病。癌的治疗的标准方法为外科疗法、化学疗法和放射线疗法，近年来， 免疫疗法作为新的治疗法备受瞩目，到目前为止已经开发了各种方法。所谓免 疫疗法，是指利用体内的免疫力来进行癌、病毒感染症等的治疗的方法。例如 细胞因子疗法、细胞免疫疗法。

所谓细胞因子疗法，是指通过将具有使T细胞、NK细胞等淋巴细胞增殖 或活化的作用的细胞因子直接给予生物体内，从而杀伤癌细胞、病毒感染细胞 的治疗法。例如，有通过给予白细胞介素2(IL-2)、干扰素的治疗法等。然而， 该治疗法在临床结果上并未得到预期那样的效果，还存在产生器官功能不全、 体液潴留(给予IL-2的情况下)、感冒症状或精神障害(给予干扰素的情况下) 等严重副作用的问题。

细胞免疫疗法是通过将从患者采取的免疫细胞在体外进行活化、增殖等的 处理后再次回输到该患者的体内，从而提高该患者的免疫力的治疗法。根据体 外处理的免疫细胞的种类，细胞免疫疗法分为激活淋巴细胞疗法、树突状细胞 疗法。其中，关于树突状细胞疗法，由于临床试验才刚刚开始，所以还未能得 到足以判断有效性的结果。

激活淋巴细胞疗法进一步分为在体外对T细胞进行活性、增殖处理的狭义 的激活淋巴细胞疗法(激活T淋巴细胞疗法、或狭义的过继免疫疗法)和对NK细 胞进行活化、增殖处理的激活NK细胞疗法。

狭义的激活淋巴细胞疗法，例如有LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞)疗法、 TIL(肿瘤组织浸润淋巴细胞)疗法、CTL(细胞毒性淋巴细胞)疗法等。

LAK疗法是培养从患者采取的淋巴细胞，使T细胞、NK细胞活化或增殖 后回输到体内的方法。该方法为了维持给予体内的LAK活性，需要向体内给予 大量的IL-2，因此，存在伴有与前述利用IL-2的细胞因子疗法同样的副作用、 不能获得预期那样的效果的问题。

TIL疗法是采取浸润到肿瘤组织等的淋巴细胞，与LAK疗法同样地体外培 养后回输到体内的方法。然而，该方法存在只能从手术摘出组织采取淋巴细胞、 不能获得预期那样的效果的问题。

CTL疗法是将淋巴细胞与手术采取的癌细胞等一起培养，通过刺激来对该 癌细胞等诱导特异性淋巴细胞的方法。也有有效案例的报告，但是存在必须通 过手术采取癌细胞，因而侵袭性极高，适应症例有限，另外在不能采取并培养 癌细胞的情况下治疗变得困难的问题，只对表达主要组织相容性抗原的癌有效 等的问题。