[发明专利]构建杏种质分子身份证的一种方法

说明书

本发明公开了构建杏种质分子身份证的一种方法，属于果树种质资源领域，分子身份证由BPPCT 002、BPPCT 038、BPPCT 039、BPPCT 040、UDP98‑409和UDAp‑471六个标记的编码构成，UDAp‑471标记的扩增产物谱带复杂，以最小和最大特征谱带的两条特征条带编码代表该标记；某些标记在一些种质上的扩增产物除正常编码的谱带外，出现第三个附加谱带，以附加谱带的特征条带编码作为这些种质分子身份证的第13位编码；当种质不能用上述方法区分时，比较种质的UDAp‑471标记扩增产物谱带，发现种质有特异条带时，将一个特异条带编码作为该种质分子身份证的第13位编码以区别种质。该方法利用分子身份证识别果树种质，利用实验结果信息充分，区别种质多。

技术领域

本发明属于果树种质资源领域，具体地说就是果树种质的一种分子识别方法。

背景技术

杏(Prunus armeniaca L.)原产中国，栽培历史悠久，种质资源丰富、品种众多，有9个种13个变种，2000多份种质资源(张加延等，1999)；近年来，随着新品种数量的增长、植物品种权保护的需要以及果树种质交流的增多，准确地鉴别杏种质和品种日益重要。

果树种质和品种鉴定的一种主要方法是SSR标记分析。SSR标记具有许多优点(Morgante等，1993)，近年来被广泛应用于果树种质和品种的指纹图谱/分子身份证构建。目前，已建立甜樱桃品种SSR指纹图谱数据库(艾呈祥等，2007)和92个梨品种的SSR标记指纹图谱(高源等，2012)；已构建分子身份证的有18份扁桃种质(Dangl等，2009)、95份苹果种质(Moriya等，2011)、40个苹果主要栽培品种(王立新等，2012)、120份苹果种质资源(高源等，2015)、80份葡萄种质资源(杜晶晶等，2013)、20个犁栽培品种(张靖国等，2014)、15份杏种质(苑克俊等，2018)以及中国桃(陈昌文等，2011)。

与过去常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测法相比，基于DNA测序的荧光引物SSR标记毛细管电泳检测方法可更准确检测目标DNA片段的大小，更适合用于构建指纹图谱和分子身份证(徐雷锋等，2014)。目前，SSR荧光标记毛细电泳检测技术已成功应用于无花果、苹果、枣、梨和杏等果树的研究(Achtak等，2009；Moriya等，2011；王立新等，2012；麻丽颍等，2012；高原等，2012；苑克俊等，2018)。

利用SSR标记研究杏的遗传多样性报道较多。何天明等(2006)分析了新疆栽培杏的群体遗传结构，张淑青等(2010)分析了69个普通杏品种的遗传多样性，王玉安等(2013)分析了甘肃地方杏品种资源的遗传多样性。Dirlewanger等(2002)在桃和樱桃中开发的一些SSR标记，Dondini等(2007)通过实验证明可用于分析杏，并将这些SSR标记定位到杏的各个连锁群中。这些工作为选择利用SSR引物构建杏种质的分子身份证奠定了良好基础。

通过杏的杂交育种工作(苑克俊等，2013，2014)，我们培育出‘玉华’、‘夏华’和‘立园’3个新品种，‘玉华’和‘夏华’已获得植物新品种权，‘立园’已获得林木良种证。本研究利用前期研究确定的SSR标记和新选取的分布在不同连锁群上的2个SSR标记引物，以包括3个新品种的22份杏种质为试材，通过SSR荧光标记PCR扩增产物毛细管电泳检测实验确定构成分子身份证的6个标记，然后利用6个标记和前期研究中提出的图谱带型双代码编码方式构建包括杏新品种的37份种质分子身份证，以期为利用分子鉴定进行杏新品种的品种权保护提供依据。

本发明创立SSR标记扩增产物谱带复杂时用最小和最大的两个特征条带编码代表该标记的方法，首次提出某些SSR标记的附加特征条带可以利用，并创立附加特征条带的编码方法；通过实验找出特征条带数相对少的BPPCT 002标记作为分子身份证第一个标记，有助于比较和区别种质。

参考文献