[发明专利]金鱼c型溶菌酶亚型及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种金鱼c型溶菌酶两个亚型及其所编码基因和应用。本发明首次从金鱼肾脏组织中克隆到了一种包含两个亚型的c型溶菌酶(gfLyz‑C1、gfLyz‑C2)，两个亚型的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ NO.2所示，其编码的c型溶菌酶氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ NO.6所示。本发明发现通过大肠杆菌重组表达获得的gfLyz‑C1、gfLyz‑C2两个重组蛋白，均对水产动物常见的几种病原细菌表现出抑菌作用和溶菌活性，尤其是当两个溶菌酶亚型蛋白联合使用时，对迟钝爱德华氏菌的溶解作用会呈现显著的叠加效应，在淡水水产养殖中具有应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程及水产养殖技术领域，更具体地，涉及一种包含两个亚型的金鱼c型溶菌酶及其编码基因和应用。

背景技术

金鱼(Carassius auratus)又称金鲫鱼，属于鲤形目、鲤科，是一种由野生鲫鱼驯化出来的观赏鱼。金鱼发源于中国，是世界上著名三大观赏鱼之一。当前，金鱼养殖业的发展迅速，全国除西藏外，所有省市都有金鱼的生产养殖，其中以北京、苏州、福州、广州为主要的养殖地区。中国的金鱼种质资源丰富，包括46个品系，315个品种，其中70％尚属未开发基础品种，具有巨大发展潜力。但是，目前金鱼的养殖产业存在育种技术水平低、病害防治技术落后、专用饲料和功能饲料的缺失等问题，对金鱼的养殖发展带来很大障碍。与其他常见的食用性鱼相比，有关观赏鱼类的养殖中面临的问题，尤其是频繁爆发的细菌病问题，相关研究是比较缺乏的。其中，迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)又称迟缓爱德华氏菌或缓慢爱德华氏菌，是严重危害水产动物的致病菌，可感染二十多种常见经济鱼类，如鳗鲡，牙鲆，罗非鱼，鲤鱼，金鱼等，给水产养殖造成了巨大损失。金鱼的迟钝爱德华氏菌病全年均可发生，主要发生在水温15℃以上，疾病发生高峰多出现在水温25～30℃，主要通过接触带有迟缓爱德华菌的病鱼而受到感染。

溶菌酶又称胞壁质酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。动物中的溶菌酶主要包括三种类型，即c型(chicken型)、g型(goose型)和i型(invertebrate型)溶菌酶，其中脊椎动物具有c型和g型两溶菌酶基因。对鱼类溶菌酶的溶菌、抗菌功能展开研究，可以了解鱼类的先天免疫防御机制，也可以作为新型抗菌肽产品的制备的基础，在鱼类非抗生素类免疫防御产品方面，具有广泛的应用前景。然而目前针对鱼类溶菌酶的研究主要集中在大菱鲆、罗非鱼、石斑鱼等鱼类，例如：中国专利CN201210452265.6公开了一种大菱鲆C型溶菌酶及其构建和应用；中国专利CN201410185795.8公开了一种转溶菌酶基因罗非鱼的制备方法；禹绍国等公开了奥利亚罗非鱼3种C型溶菌酶基因的克隆及其序列分析研究(禹绍国,叶星,张莉莉,等.奥利亚罗非鱼3种C型溶菌酶基因的克隆及其序列分析[J].农业生物技术学报,2010,18(1):66-74.)；秦启伟等公开了石斑鱼两种溶菌酶基因的克隆研究(石斑鱼两种溶菌酶基因的分子克隆与功能研究[C]//“全球变化下的海洋与湖沼生态安全”学术交流会论文摘要集.2014.)。目前还未见有关于金鱼溶菌酶的相关研究报道，研究金鱼溶菌酶将为防治水产动物疾病具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种金鱼c型溶菌酶亚型的编码基因。

本发明的另一目的在于提供所述金鱼c型溶菌酶。

本发明的再一目的在于提供所述金鱼c型溶菌酶的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

金鱼c型溶菌酶亚型的编码基因gfLyz-C1和/或gfLyz-C2，gfLyz-C1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示；gfLyz-C2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4所示。