[发明专利]hsa-miR-378i作为标志分子在制备诊断结核病试剂盒中的用途及其检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种hsa‑miR‑378i作为标志分子在制备诊断结核病试剂盒中的用途及其用于诊断结核病的检测试剂盒，所述hsa‑miR‑378i来源于血浆外泌体，所述hsa‑miR‑378i的碱基序列如SEQ ID NO：1所示。所述检测试剂盒中包含特异性检测标志分子的检测试剂。同时还公开了hsa‑miR‑378i联合hsa‑miR‑148a‑3p、hsa‑miR‑150‑5p中任意一种或者两种作为标志分子在制备结核病诊断试剂盒中的用途。通过实验结果表明，hsa‑miR‑378i对结核病的诊断具有更高的特异性、灵敏度以及诊断效能。因此，本申请在结核病的诊断领域具有极大的应用前景和市场前景。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及hsa-miR-378i作为标志分子在制备诊断结核病试剂盒中的用途及其检测试剂盒。

背景技术

目前，结核病（TB）已成为全球死亡的重要原因，这在很大程度上归因于结核病患者的诊断和治疗困难。早期发现和早期诊断是减少传播机会、控制结核病疫情的关键环节。因此，确定新的生物标志物对结核病及时、准确的诊断，在控制结核病上起着决定性的作用。近年来研究表明，外泌体与结核分枝杆菌感染关系密切，外泌体是由多种活细胞分泌的胞外囊泡小体，大小约为30-100nm，含有多种生物活性成分，参与细胞间的通讯和免疫调节，并参与了炎症反应、细胞凋亡、免疫应答等多种病理生理过程。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一类高度保守的非编码RNA（non-coding RNA），通过与信使RNA中特异的互补序列相结合，诱导信使RNA降解或抑制蛋白质翻译，调节特定靶蛋白在细胞内的表达。在进行细胞间信息交流时，细胞将miRNA浓集在一起，包装进外泌体，由外泌体被释放到细胞间隙。外泌体作为miRNA载体，其运载机制复杂，外泌体横向转运细胞成分的能力，赋予它们以抑制或激活靶细胞活动的能力，被认为是细胞间信号传导的重要工具。

外泌体内包裹的miRNA与相关蛋白复合物一起到达临近或者远端细胞内，实现了细胞间的信息交流。结核分枝杆菌感染的巨噬细胞所分泌的外泌体含有可溶性分枝杆菌蛋白，这些病原体抗原成分可以诱导特异性免疫应答。结核分枝杆菌感染巨噬细胞后分泌的外泌体可促进巨噬细胞肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ的分泌从而增强巨噬细胞的炎症反应。结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞所释放的外泌体与未感染的小鼠巨噬细胞的外泌体相比，其miRNA含量存在不同，外来的miRNA可以促进巨噬细胞的活化，刺激炎症介质的产生，诱导受体细胞的凋亡。携带RNA的外泌体，特别是miRNA，在疾病中的诊断中突显潜力。

现有的辅助诊断结核病的miRNA是大多来源于血清，但由于血清成分复杂，可能导致miRNA来源不明，从而对检测结果产生一定的影响。然而，外泌体miRNA因受其表面膜的保护而具有较好的稳定性。与血浆或血清miRNA相比，因其成分没有血清复杂，使得外泌体富集的miRNA作为生物标志物具有灵敏性高、特异性好等优点。且样本可通过无创方式获得，使得血浆外泌体miRNA具备了成为无创、可靠、稳定的生物标志物的优势。现有技术公开了通过血浆外泌体的miRNA作为标志分子用于诊断结核病的技术方案，然而其检测灵敏度低，不能实现高灵敏度、高特异性的检测标准。

发明内容

为了解决以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供hsa-miR-378i作为标志分子在制备诊断结核病试剂盒中的用途及其检测试剂盒，标志分子来源于血浆外泌体，其作为生物标志物具有样本要求低、稳定性好、亲和性好、灵敏性高、特异性好等优点。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

hsa-miR-378i作为标志分子在制备诊断结核病试剂盒中的用途，所述的hsa-miR-378i来源于血浆外泌体，所述的hsa-miR-378i的碱基序列如 SEQ ID NO:1 所示。