[发明专利]一种野菊花配方颗粒的质量检测方法及应用

权利要求书

1.一种野菊花配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法包括：

构建野菊花配方颗粒的指纹图谱，所述指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

步骤（1）、混合对照品溶液制备：称取十种对照品5-咖啡酰奎宁酸、绿原酸、4-咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷适量，加溶剂配制成混合对照品溶液，分别取1、2、4、6、8、10 mL混合对照品溶液于10 mL容量瓶中，加溶剂定容至刻度，得到系列混合对照品溶液，4℃避光保存，备用；

步骤（2）、供试品溶液制备：称取不同批次的野菊花配方颗粒0.1 g于100 mL具塞锥形瓶中，用移液管移取50 mL的溶剂称定重量，超声，放冷，称定重量，再用同一种溶剂补足减失重量，摇匀，过0.45 μm滤膜；

步骤（3）、检测：采用高效液相色谱对步骤（1）中混合对照品溶液和步骤（2）中供试品溶液分别进行检测，并记录混合对照品溶液的指纹图谱和供试品溶液的指纹图谱；

步骤（4）、建立对照指纹图谱：对步骤（2）中不同批次的野菊花配方颗粒供试品溶液进行高效液相色谱检测，色谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，2012.130723版本，以第1批野菊花配方颗粒供试品溶液的指纹图谱为参照图谱，时间窗宽度为0.1，中位数法生成对照图谱，经过多点校正、峰匹配得到不同批次的野菊花配方颗粒的对照指纹图谱；

野菊花配方颗粒的指纹图谱模式识别法，所述模式识别法包括相似度评价、主成分分析和聚类分析：

所述相似度评价为根据步骤（4）所述不同批次的野菊花配方颗粒对照指纹图谱计算相似度；

所述主成分分析为将不同批次野菊花配方颗粒的共有峰峰面积导入SPSS软件，选取特征值大于1的三个主成分，以三个主成分的方差贡献值进行投影，得主成分分析图，所述主成分分析图中有10个共有色谱峰能体现野菊花配方颗粒整体分类信息，作为野菊花配方颗粒的10个特征峰；

所述聚类分析为以野菊花配方颗粒指纹图谱中共有色谱峰峰面积为变量，借助SPSS数据统计软件对原始数据标准化，采用欧氏距离进行系统聚类分析；

一测多评法，所述一测多评法测所述10个共有色谱峰的含量，选择步骤（1）中的十种对照物中的一种为内参物，分别取步骤（1）中混合对照品溶液2、5、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，计算相对校正因子平均值作为各组分相对校正因子f_k/m，通过相对校正因子计算10个共有色谱峰的含量；

所述各成分相对校正因子按公式f_k/m＝f_k/f_m＝(C_m×A_k)/(C_k×A_m)计算，式中A_k为内参物峰面积，C_k为内参物质量浓度，A_m为组分峰面积，C_m为组分质量浓度；

步骤（3）和步骤（4）中所述高效液相色谱的色谱条件为采用Agilent Eclipse XDB C₁₈色谱柱，尺寸为4.6 mm×250 mm，填料颗粒度为5 µm，流动相为乙腈A~ 0.1%磷酸水溶液B，进行梯度洗脱，检测波长为325~335 nm，柱温30~35℃，进样量10 µL；

所述梯度洗脱的时间程序为0～5 min，5～20 min，20～35 min，35～40 min，40～45min，有机相的体积百分比分别为10～15% A，15～20% A，20～40% A，40～70% A，保持70%A。

2.如权利要求1所述的一种野菊花配方颗粒的质量检测方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（2）中所述溶剂均为甲醇水溶液，步骤（2）中所述超声的时间为10~30 min；所述甲醇水溶液为体积浓度为50%的甲醇水溶液。