[发明专利]粪便菌群在制备治疗慢性乙型肝炎微生态制剂中的应用

权利要求书

1.粪便菌群的移植方法，其特征在于包括以下步骤：

1)分离纯化健康供体粪便中的粪便菌群：取健康供体的粪便，溶解于0.9％NaCl溶液中制成粪水稀释，采用粪便分析前处理仪进行分离提取，提取后得到的菌液在4℃条件下离心后得到菌体，待用；

2)将粪便菌群移植到患者的肠道内，重塑患者失衡的肠道菌群至平衡状态。

2.如权利要求1所述粪便菌群的移植方法，其特征在于在步骤1)中，所述健康供体是经过严格的情商、智商、心理及素质等问卷调查、粪便及血清学检查、宏基因组测序等质量控制得到的健康供体；

具体条件如下：

(1)年龄筛选：18～26岁的高校大学生；

(2)问卷调查：涵盖基本信息、疾病史、胃肠道状况、焦虑量表、抑郁量表、睡眠质量调查表、日常饮食调查表，意向供体还需要填写人格、智商、情商、皮肤、气质等超过300项的调查问卷(基于肠脑轴、肠皮轴等原理，即肠道菌群影响着人的皮肤、气质等，需要把关供体基础的外在表现作为第一排除对象)，合格者将进入临床体检环节；

(3)临床体检：包含基础疾病排查、血液系统相关检查、耐药菌株(金黄色葡萄球菌和沙门菌属)、致病菌、致病病毒等，临床体检全部符合者才可以进入到备选供体行列，需无慢性乙型肝炎相关疾病的健康人，并且健康供体会不定期体检以确认健康状况；

(4)宏基因组测序：通过宏基因组高通量测序，得到测序结果，以有益菌、有害菌含量及菌群多样性为量化指标，确定最终合格健康供体。

3.如权利要求1所述粪便菌群的移植方法，其特征在于在步骤1)中，所述健康供体粪便与NaCl溶液的配比可为：100～200g︰750～1000mL；所述粪便分析前处理仪可采用厦门承葛生物科技有限公司生产的粪便分析前处理仪TG-01；所述离心可按照4000～5000g条件离心5min；所述待用可存储于-80℃条件下待用。

4.如权利要求1所述粪便菌群的移植方法，其特征在于在步骤2)中，所述患者为满足纳入和排除标准的患者；其中患者的纳入标准为1)年龄18～65岁；2)无饮酒史或饮酒折合乙醇量男性每周<140g，女性每周<70g；3)符合我国慢性乙型肝炎防治指南中HBeAg阴性慢性乙型肝炎的诊断标准；4)符合我国慢性乙型肝炎防治指南抗病毒药物治疗指征；5)经规范抗病毒药物治疗超过1年仍为HBsAg阳性；6)血清转氨酶和谷氨酰氨基转肽酶在正常值上限内，或增高小于10倍正常值；7)自愿参加并签署知情同意书者,同时符合上述7项的患者，方可认为满足纳入；患者的排除标准为：1)酒精性肝病、慢性丙型肝炎、自身免疫性肝病、肝豆状核变性；2)使用他莫昔芬、乙胺碘呋酮、丙戊酸钠、甲氨蝶呤、糖皮质激素；3)全胃肠外营养、炎症性肠病、甲状腺功能减退症、库欣综台征、β脂蛋白缺乏血症以及一些与IR相关的综合征、胃肠道手术；4)肝脏恶性肿瘤、感染和胆道疾病,以及正在服用或近期内曾经服用可导致肝脏酶谱升高的中西药物者；5)中、重度肾功能损伤的患者，血肌酐＞2mg/dL或177mmol/L；6)中、重度慢性阻塞性肺部疾病；7)重度高血压患者、脑血管意外患者；8)有充血性心力衰竭、不稳定性心绞痛的患者；9)组前7天内使用了抗生素且不愿停药洗脱、长期服用调脂、降糖药物及其他保肝药物；10)使用抗生素、其他微生态制剂、胃肠动力药等可影响肠道菌群的制剂；11)伴发其它可能妨碍其入组或影响其生存的严重疾病，如肿瘤或艾滋病；12)精神或法律上的残疾患者；13)育龄期妇女且研究期间准备怀孕患者；14)被认为不适合入组的其他患者；15)正在参加其他临床试验的患者，凡符合以上任何1条的患者，均予以排除。

5.如权利要求1所述粪便菌群的移植方法，其特征在于在步骤2)中，所述将粪便菌群移植到患者的肠道内，采用口服，鼻胃管、鼻空肠管或内窥镜插入上消化道进行菌群移植；所述口服可将功能菌群制备为肠溶性菌群胶囊，再将含有菌群胶囊经口服方式经消化道移植到患者的肠道内；

所述菌群胶囊的制备方法可为：将步骤1)所得得菌群液用胶囊囊材进行套装，包装好后置于-80℃条件下保存，即为菌群胶囊；所述胶囊囊材可采用双层套装的方式。