[发明专利]一种适用于流式细胞仪检测植物C值的细胞核的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910973618.9 | 申请日： | 2019-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN110595988A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 杨俊波;贾艳霞 | 申请（专利权）人： | 中国科学院昆明植物研究所 |
| 主分类号： | G01N15/14 | 分类号： | G01N15/14;G01N15/10;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/34 |
| 代理公司： | 11569 北京高沃律师事务所 | 代理人： | 吕纪涛 |
| 地址： | 650201 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞核 流式细胞仪 钢珠 新鲜植物 解离液 制备 叶片 检测 高效可靠 基因组学 滤膜过滤 植物材料 植物样本 研磨 数量比 需用量 遗传学 倍性 | ||
1.一种适用于流式细胞仪检测植物C值的细胞核的制备方法，包括以下步骤：将新鲜植物叶片、解离液和钢珠混合，在25～40HZ的条件下研磨30～45S，静置，滤膜过滤，收集滤液得到细胞核；
所述新鲜植物叶片的质量、解离液的体积和钢珠的数量比为0.015～0.025g:0.6～1.0mL:10～15个；
所述钢珠的直径为0.15～0.25cm；
所述解离液包括以下浓度的组分：40～50mM MgCl2·6H2O，15～25mM MOPS，25～35mM柠檬酸钠，0.5％～1.5％质量体积浓度为0.5％～1.5％的PVP-40，体积浓度为0.1％～0.3％的Tritonx-100和8～12mM Na2EDTA。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，新鲜植物叶片的质量、解离液的体积和钢珠的数量比为0.02g:0.8mL:12个。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述研磨的频率为30HZ；所述研磨的时间为40S；所述研磨的温度为0～4℃。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述静置的时间为10～15min；所述静置的温度为0～4℃。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述滤膜过滤采用的滤膜的直径为30～50μm。
6.权利要求1～5任意一项所述制备方法得到的细胞核。
7.权利要求6所述细胞核在检测植物C值中的应用，包括以下步骤：
将所述细胞核和碘化丙啶、RNAase混合得到混合液，静置混合液后在流式细胞仪上检测，得到植物C值。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述混合液中碘化丙啶的浓度为45～55μg/mL；所述混合液中RNAase的浓度为45～55μg/mL。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述静置的时间为0.5～2h；所述静置的温度为0～4℃。
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