[发明专利]检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用

说明书

本发明提供了一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用，涉及生物技术领域，本发明提供的检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法，根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物，再采用所述引物对待测样品DNA进行PCR扩增，根据检测结果进行判断。该方法根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物，即设计得到的引物用于扩增的是缺失基因中的一部分或全部片段，因此，该引物在有效扩增出野毒株基因的基础上不会扩增到减毒活疫苗株基因，能够准确、有效地对布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株进行区分，普适性广，特异性强，且准确率高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用。

背景技术

当前使用的布鲁氏菌疫苗为减毒活疫苗，在当下布鲁氏菌病高度流行的时期，这些疫苗对布鲁氏菌病的防护提供了有力的保障。但减毒活疫苗的使用也存在一定的不足，主要表现为无法区分野毒感染与疫苗免疫，对人员存在感染风险。

基因标记疫苗是在原有疫苗菌株的基础上利用分子生物学技术对其进行核酸标记，通过体外制备其标记抗原，利用血清学技术、分子检测技术对疫苗菌株和野毒进行区分，进而达到鉴别。常规血清学检测技术是针对抗原所产生的抗体进行检测，但任何抗原所产生的抗体的持续时间均有一定的局限性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的第二个目的在于提供上述检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法的应用。

本发明提供了一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法，所述方法包括：根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物，采用所述引物对待测样品DNA进行扩增，若检测扩增产物中含有特异性DNA片段，则所述待测样品含有布鲁氏菌野毒株。

进一步地，所述布鲁氏菌减毒活疫苗株包括A19、S2、M5、S19或Rev.1中的一种或多种。

进一步地，所述引物包括如下(a)-(c)中的一种或多种：

(a)A19-F：5’-GGGAGGAGGGCAGTTGTT-3'；

A19-R：5'-GCCACCGCATTCCGATAA-3'；

(b)S2-F：5-’GGCGGCACAAGAGGAACT-3’；

S2-R：5'-GCGGGTACGCCTTGATTG-3'；

(c)M5-F：5’-ATTCCCATGACTGAAGAACA-3’；

M5-R:5’-TAACGCTTCCCTCGATTT-3’。

进一步地，(a)引物扩增产物的大小为254bp；和/或，

(b)引物扩增产物的大小为300bp；和/或，

(c)引物扩增产物的大小为207bp。

进一步地，所述扩增包括普通PCR扩增、qPCR扩增、RPA扩增或LAMP扩增。

进一步地，采用多重PCR的方式进行检测。

进一步地，所述待测样品来源于布鲁氏菌减毒活疫苗株的被接种体，所述被接种体的接种时间为4-90天。

进一步地，所述被接种体包括牛、羊、猪、犬或人。

进一步地，所述待测样品为血液、奶样或组织。

另外，本发明还提供了上述的方法在如下(i)-(iii)中的应用：