[发明专利]基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒

说明书

本发明涉及微生物检测技术领域，特别涉及基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，包括GNP1复合物和GNP2复合物；GNP1复合物由Cas蛋白与HPV‑6型的gRNA1复合而成，gRNA1的基因序列由引物序列1和基因E1 replication protein MK313768.1 2399‑2421构成；GNP2复合物由Cas蛋白与HPV‑11型的gRNA2复合而成，gRNA2的基因序列由引物序列2和基因E2 regulatory protein MK313768.1 3414‑3436构成。本发明的免疫检测试剂盒具有较高的敏感性、特异性和准确性。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，特别涉及基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒。

背景技术

尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)感染所致的以肛门生殖器部位增生性损害为主要表现的性传播疾病，大多发生于18～50岁的中青年人。大约经过半个月至8个月，平均为3个月的潜伏期后发病，此病较为常见，主要通过性接触传播。HPV有不同的亚型，最常引起尖锐湿疣的HPV有6型和11型。

目前，临床上诊断尖锐湿疣主要有以下几种方法：

1.醋酸白实验：用3％～5％醋酸液局部外涂或湿敷5～10分钟可在HPV感染区域发白，即所谓“醋酸白现象”。但特异性不高，有些慢性炎症，如念珠菌性外阴炎、生殖器部位外伤和非特异性炎症均可出现假阳性。

2.细胞学检查：用阴道或宫颈疣组织涂片，巴氏染色，可见到两种细胞，即空泡化细胞及角化不良细胞同时存在，对尖锐湿疣有诊断价值。

3.组织病理检查：如在棘层上方及颗粒层出现空泡化细胞，是诊断HPV感染的重要证据。

4.免疫学试验：采用抗HPV蛋白的抗体检测病变组织中的HPV抗原，该方法敏感性不高，检出率只有50％左右。

5.核酸杂交试验：是检测HPV感染的重要的手段，包括斑点印迹法(dot blothybridization)、组织原位杂交法、核酸印记法(Southern blot hybridization)。这些方法的特异度和敏感性均较高，是诊断HPV感染的敏感而可靠的方法。但技术操作繁琐，临床上没有普遍开展。

6.聚合酶链反应(PCR)：是目前检出HPV感染的最敏感的方法，又可做型特异度分析，具有敏感性高、方法简便迅速的特点。

上述六种检测方法中，PCR检测是在三甲级别的大医院使用最广泛的方法，但是PCR使用需要经过专门培训的人员和验收合格的场地，且设备比较昂贵，在二级及以下医院没办法开展。

相对的，免疫学检测利用抗体抗原的特异性结合，准确性高且成本低于PCR检测，因此用于检测HPV抗原具有重要意义。但是，免疫学检测能实现的前提是找到针对HPV的抗体，由于HPV无法体外培养，因此无法提取天然的HPV病毒用于免疫动物得到针对HPV的抗体，体外合成的HPV多肽不具有天然构象，免疫得到的抗体不能与天然的HPV病毒反应，因此利用现有的方法无法开发出HPV免疫检测试剂盒。

为解决现有技术中无法制备得到HPV抗体或抗体活性很弱时，无法开发出相应免疫检测试剂盒的难题，本申请的发明人研制出人工合成的GNP复合物(guide RNA-Protein)作为替代抗体，用于开发HPV免疫检测试剂盒。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其将HPV特有的gRNA与Cas蛋白相连，组成一种特异性针对HPV的GNP复合物替代HPV抗体，以此开发出的HPV免疫检测试剂盒，具有较高的敏感性、特异性和准确性。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：