[发明专利]基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于Cas蛋白及gRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其特征在于，包括GNP1复合物和GNP2复合物；

所述GNP1复合物由Cas蛋白与HPV-6型的gRNA1复合而成，所述gRNA1的基因序列由如SEQ ID NO:1所示的引物序列1和基因E1 replication protein MK313768.1 2399-2421构成；

所述GNP2复合物由Cas蛋白与HPV-11型的gRNA2复合而成，所述gRNA2的基因序列由如SEQ ID NO:2所示的引物序列2和基因E2 regulatory protein MK313768.1 3414-3436构成；

SEQ ID NO:1为：5'-ATGATGCCACACAACCATGTTGG-3'，

SEQ ID NO:2为：5'-ACGGCGTGTCGGCGCCGCCTAGG-3'。

2.根据权利要求1所述的基于CAS蛋白及GRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其特征在于，所述Cas蛋白为Cas9蛋白和Cas13蛋白中的一种。

3.根据权利要求1所述的基于CAS蛋白及GRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其特征在于，所述免疫检测试剂盒为HPV酶联免疫试剂盒、HPV免疫层析试剂盒和HPV化学发光免疫试剂盒中的一种。

4.根据权利要求3所述的基于CAS蛋白及GRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其特征在于，所述HPV酶联免疫试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

①、利用电脑软件设计并体外合成针对HPV特异性的gRNA1和gRNA2；

②、将Cas蛋白分别与gRNA1和gRNA2混合，对应形成GNP1复合物和GNP2复合物；

③、将GNP1复合物包被于酶标板上；

④、用HRP标记GNP2复合物，作为HRP标记品；

⑤、配制底物显色A液、底物显色B液、清洗液和终止液；

⑥、将步骤③、④、⑤中得到的半成品分别单独包装后进行装盒，得到最终的酶联免疫试剂盒；

或

①、利用电脑软件设计针对HPV特异性的gRNA1和gRNA2；

②、将Cas蛋白分别与gRNA1和gRNA2混合，对应形成GNP1复合物和GNP2复合物；

③、将GNP2复合物包被于酶标板上；

④、用HRP标记GNP1复合物，作为HRP标记品；

⑤、配制底物显色A液、底物显色B液、清洗液和终止液；

⑥、将步骤③、④、⑤中得到的半成品分别单独包装后进行装盒，得到最终的酶联免疫试剂盒。

5.根据权利要求4所述的基于CAS蛋白及GRNA复合物制备的人乳头瘤病毒6型和11型免疫检测试剂盒，其特征在于，步骤②中，将1mL 1mg/mL的所述Cas蛋白与1 OD的gRNA1或gRNA2混合，37℃反应30min，对应形成GNP1复合物和GNP2复合物；步骤③中，所述GNP1复合物或GNP2复合物在包被于酶标板上时，稀释成2μg/mL，包被量为100μL/孔，包被6h后，用15wt%的FCS于4℃封闭过夜。