[发明专利]一种菊花CmSVP基因的应用

说明书

本发明公开了菊花CmSVP基因的应用，根据已获得的转录组数据的CmSVP全长序列，设计CmSVP基因的特异性引物；进行PCR扩增；将电泳检测后的目的条带切胶回收纯化；回收后的DNA连接pEASY‑Blunt载体，并转化大肠杆菌感受态，挑取6个单克隆测序，获得pEASY‑Blunt‑CmSVP；测序后的序列通过NCBI网站的Blast程序进行基因比对，利用ORF finder预测菊花CmSVP基因的ORF区及推测的氨基酸序列；利用Expasy在线分析软件分析菊花CmSVP蛋白的理化性质；利用MEGA6.0软件构建不同植物SVP蛋白的系统发育进化树；再将CmSVP基因在菊花中的遗传转化培养植株，获得明显区别与野生型的转基因菊花品种，转基因菊花的开花时间晚于野生型菊花，且其茎的伸长生长优于野生型菊花。

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，特别涉及一种菊花CmSVP基因的应用。

背景技术

“耐寒惟有东篱菊，金粟初开晓更清”，菊花作为我国的传统名花，历来悠久，被视为孤标亮节、高雅傲霜的象征。菊花品种繁多，可用于插花、盆栽、药材等，具有很高的观赏价值和药用价值，而花期问题是影响人们追求四季赏菊最重要的限制因素。菊花的花期主要受温度，光照条件的影响。大部分菊花品种属于典型的短日照植物，需要经过一定时数的短日照才可以进入花芽分化阶段，这极大地限制了其观赏及应用，菊花的四季开放一直是育种学家们的目标。

SVP（SHORT VEGETATIVE PHASE）基因是MADS-box家族STMADS11亚家族中重要的开花负调控因子，其同源基因广泛存在于各种植物中，现已在多种草本、木本植物中均克隆得到SVP同源基因。SVP主要在营养器官表达，不同物种的SVP基因表达模式相似，而同一物种中同源基因表达呈现多样性。SVP基因作为开花抑制因子，参与自主途径、GA途径及温敏途径，其表达水平直接导致开花时间的改变。同时SVP基因和AP1、AGL24通过功能冗余调控花分生组织特异性和抑制B类，C类和E类基因的表达，从而影响植株花发育，花序建成。

近年来，SVP基因在植物开花响应机制被广泛研究，特别是对温度敏感性的植物。大量的研究表明SVP及其同源基因在不同植物的表达模式及其功能不尽相同。目前菊花CmSVP基因已成功分离并在拟南芥中验证其抑制拟南芥开花并影响其花序发育，该成果已于2017年发表（Gao Yaohui, Gao Yike, Fan Min et al. Overexpression ofChrysanthemum morifolium SVP gene delays blossoming and regulatesinflorescence architecture in transgenic Arabidopsis[J]. Canadian Journal ofPlant Science. 2017, 97:1130-1139.）。而在菊花花期及形态建成中的相关功能未有报道。

本研究从菊花中分离出一个推迟开花时间、并对茎生长具有促进作用的CmSVP基因，并研究对该基因的表达形式进行分析，提出了利用CmSVP基因进行推迟菊花开花时间、并促进其茎的伸长的基因工程改良方法。