[发明专利]一种提高猪圆环病毒增殖的方法

权利要求书

1.一种提高猪圆环病毒增殖的方法，包括如下步骤：

（A1）降低宿主细胞中RBP4的蛋白的表达和/或活性；

（A2）用（A1）处理过的所述宿主细胞繁殖猪圆环病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述宿主细胞为PK-15细胞；所述猪圆环病毒为II型猪圆环病毒。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤（A1）中，所述降低宿主细胞中RBP4蛋白的表达和/或活性为敲除所述宿主细胞中RBP4蛋白的编码基因。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述“敲除所述宿主细胞中RBP4蛋白的编码基因”是通过序列特异性的基因编辑技术对所述编码基因进行特异性剪切来实现的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述序列特异性的基因编辑技术为CRISPR/Cas9基因编辑技术。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述“敲除所述宿主细胞中RBP4蛋白的编码基因”是通过CRISPR/Cas9基因编辑技术实现的；以RBP4蛋白的编码基因中符合5’-N_X-NGG-3’或5’-CCN-N_X-3’序列排列规则的片段为靶序列；N表示A、G、C和T中的任一种，14≤X≤30，且X为整数，N_X表示X个连续的脱氧核糖核苷酸。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述靶序列为SEQ ID No.1。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述“敲除所述宿主细胞中RBP4蛋白的编码基因”是通过包括如下步骤的方法实现的：将重组载体pX459M-gRNA^RBP4导入所述宿主细胞中；所述重组载体pX459M-gRNA^RBP4为将SEQ ID No.1所示DNA克隆到pX459M质粒的两个酶切位点Bbs I之间后得到的重组质粒。

9. RBP4基因被敲除的PK-15细胞，是按照包括如下步骤的方法制备的：将重组载体pX459M-gRNA^RBP4导入PK-15细胞；所述重组载体pX459M-gRNA^RBP4为将SEQ ID No.1所示DNA克隆到pX459M质粒的两个酶切位点Bbs I之间后得到的重组质粒。

10.权利要求9所述RBP4基因被敲除的PK-15细胞或如下（B1）-（B3）中任一所示生物材料在提高猪圆环病毒增殖中的应用；

（B1）SEQ ID No.1所示DNA；

（B2）将SEQ ID No.1中的T替换为U后的gRNA；

（B3）含有SEQ ID No.1所示DNA的表达盒、重组载体。

11.权利要求9所述RBP4基因被敲除的PK-15细胞或如下（B1）-（B3）中任一所示生物材料在制备用于提高猪圆环病毒增殖的产品中的应用；

（B1）SEQ ID No.1所示DNA；

（B2）将SEQ ID No.1中的T替换为U后的gRNA；

（B3）含有SEQ ID No.1所示DNA的表达盒、重组载体。

12.权利要求1-8中任一所述方法或权利要求9所述RBP4基因被敲除的PK-15细胞或如下（B1）-（B3）中任一所示生物材料在制备猪圆环病毒疫苗中的应用；

（B1）SEQ ID No.1所示DNA；

（B2）将SEQ ID No.1中的T替换为U后的gRNA；

（B3）含有SEQ ID No.1所示DNA的表达盒、重组载体。

13.RBP4基因在制备用于提高猪圆环病毒增殖的产品中的应用。

14.根据权利要求10-13中任一所述的应用，其特征在于：所述猪圆环病毒为II型猪圆环病毒。