[发明专利]一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用

说明书

本发明提供一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用，所述方法包括先采集骨肉瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将新鲜的患者肿瘤组织块异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种原位移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将采集到的新鲜的患者肿瘤组织块浸泡在无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠的骨髓腔中，缝合小鼠皮肤上的手术切口，养育小鼠使得其骨髓腔中肿瘤生长。相比于皮下建模，原位建模情况更真实，筛选出来的药物方案能更好地用在患者身上，且原位建模理论上来说比皮下建模会更容易发生肿瘤转移。

技术领域

本发明涉及肿瘤移植小鼠模型的建立领域，具体涉及一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用。

背景技术

骨肉瘤是湖南省最常见原发性骨恶性肿瘤，其恶性程度极高，易发生肺转移，致残率与死亡率极高，预后极差。75％骨肉瘤患者为青少年，既往一经发现多采取截肢手术治疗，即便如此，患者截肢后5年存活率也仅为5～20％。这为患者及其家庭带来极大的精神伤害，也为社会乃至国家都带来沉重的经济负担，带来更大的社会问题。因为骨肉瘤组织异质性的存在，既往基于骨肉瘤细胞系的基础研究结果仅仅不到20％可以在临床骨肉瘤患者体内得到重现，较大程度导致临床骨肉瘤诊治水平的滞后。

肿瘤模型是肿瘤研究的重要载体。研究发现，细胞在传代过程中不断适应体外环境，生物学特点与在体肿瘤细胞不符，细胞系异种移植模型与患者本身肿瘤存在较大一致性，而且现有的肿瘤动物模型缺乏免疫系统，模型的缺陷导致抗肿瘤药物临床试验的失败率高。

人源性肿瘤异种移植(patient derived xenograft，PDX)模型是一种体内模型，通过将病人的新鲜肿瘤组织处理后直接移植到免疫缺陷小鼠上，依靠小鼠提供的环境生长与逐步传代，能以小鼠为载体大量扩增患者肿瘤组织。PDX模型有如下优点：首先，其相当于一个模型对应一个病人，能很好地反应不同个体间肿瘤的差异性，相较于传统模型更能够反应临床病人的实际情况；其次，PDX模型可以进行传代，并且传代的肿瘤组织能够和初始肿瘤组织在基因拷贝数、基因突变和表达模式等保持高度的一致性，相当于对于病人肿瘤样本进行了扩增，这就为药物筛查和病人患病机制研究提供了很好的条件；再次，PDX培养的肿瘤块，可以冻存起来复苏之后依然能够构建新的PDX模型，相当于构建了不同病人的肿瘤活体库。

现有的技术主要是通过将新鲜骨肉瘤组织进行切碎处理或进行细胞匀浆化处理后，在皮下建模，匀浆处理后被认为破坏了肿瘤组织本身微环境的特点，不能良好的保持肿瘤与周围间质与患者的一致性。

专利申请CN201410083459提供一种活体肿瘤组织库的建立方法及其应用，通过将人体癌症患者手术后的肿瘤组织移植到SCID小鼠的肾脏被膜下，在小鼠体内存活并传代保存，得到活体肿瘤组织库，活体肿瘤组织库是在单一的肿瘤组织异种移植基础上，将众多的人体肿瘤组织以活体组织库的形式在动物体内保存、备用。该活体肿瘤组织库包括横向的多种肿瘤，也包括纵向的某种肿瘤的各种亚型或者各种发展阶段。该活体肿瘤组织库具有多种用途，包括在确定癌症患者手术后个性化治疗方案方面的应用，在抗癌药物的肿瘤特异性筛选方面的应用，以及在构建人体癌症研究的动物模型方面的应用。在该专利申请中，所述人体肿瘤可以为肺癌、肝癌、胃癌、骨肉瘤等人体实体恶性肿瘤。其中实施例1和对比实施例1以及图1b为脑胶质瘤组织块移植到小鼠的皮下和肾脏被膜下的情况比对示意图，可见脑胶质瘤组织块移植到肾脏被膜下生长的肿瘤明显大于移植到小鼠的皮下生长的肿瘤。

该发明解决了异种移植小鼠模型中肿瘤生长效率的问题，但本领域还需要更多种类的骨肉瘤异种移植小鼠模型及其构建方法。

发明内容