[发明专利]一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括先采集骨肉瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将新鲜的患者肿瘤组织块异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种原位移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将采集到的新鲜的患者肿瘤组织块浸泡在无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠的骨髓腔中，缝合小鼠皮肤上的手术切口，养育小鼠使得其骨髓腔中肿瘤生长。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采集的骨肉瘤患者肿瘤组织块保存在无菌生理盐水中，并置于冰上，先经病理确诊为骨肉瘤患者肿瘤组织块，然后异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫缺陷小鼠为NOD/SCID小鼠。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述骨肉瘤患者肿瘤组织块的单边长度小于等于3mm，优选小于等于1mm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，原位移植时小鼠的体重为8～20g，优选为12～15g，所述无菌孵育液中包含抗生素和胎牛血清，优选所述无菌孵育液中包含抗生素和DMEM培养基或RPMI-1640培养基，更优选所述抗生素包含青霉素和链霉素。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将患者肿瘤组织块植入小鼠的骨髓腔中的具体步骤包括：先在小鼠的股骨或胫骨处作皮肤切口，再用牙科钻在小鼠胫骨处钻孔，开孔处的胫骨被钻摩成屑，开孔并露出骨髓后将患者肿瘤组织块植入骨髓腔中，再缝合小鼠皮肤上的手术切口。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，养育小鼠待其胫骨皮肤肿胀后，所述方法还包括采用小动物活体成像仪观察小鼠胫骨肉瘤大小，优选还采用小动物活体成像仪观察肿瘤是否转移到小鼠的内脏。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括养育小鼠使得其骨髓腔中肿瘤生长后解剖小鼠，剥离瘤体得到P0代肿瘤瘤体，取P0代肿瘤瘤体异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内得到P1代肿瘤瘤体，可选地取P1代肿瘤瘤体异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内得到P2代肿瘤瘤体，以此类推传代，优选所述方法还包括将部分P0代肿瘤瘤体程序降温并保存在液氮中，以及可选地包括将部分P1和P2代肿瘤瘤体程序降温并保存在液氮中。

9.一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括在无菌条件下将新鲜的小鼠模型中的P0代骨肉瘤肿瘤组织、P1代骨肉瘤肿瘤组织或P2代骨肉瘤肿瘤组织异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种原位移植包括选用年龄在2～6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将所述骨肉瘤肿瘤组织块浸泡在无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将所述骨肉瘤肿瘤组织块植入小鼠骨髓腔中，缝合小鼠皮肤上的手术切口，养育小鼠使得其骨髓腔中肿瘤生长。

10.一种如权利要求1～9中任意一项所述方法得到的小鼠模型在筛选预防或治疗骨肉瘤药物中的应用。