[发明专利]一种直观测定SOD酶活性的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种直观测定SOD酶活性的方法。该方法将菌株接入液体培养基培养出发酵液后，在含有能刺激细胞产生自由基的物质的固体培养基上进行点板，点板后将菌株培养至指数生长期，观察菌圈大小，菌圈越小，说明SOD酶活力越小。本发明的能够直观测定SOD酶活性，无需破碎细胞提取酶液，操作简单。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种直观测定SOD酶活性的方法。

背景技术

超氧自由基(O₂·^-)是一种典型的活性氧(ROS)，一般认为是其他ROS的前体，ROS会造成氧化胁迫以及氧化损伤，从而引起细胞衰老和细胞凋亡。过氧化物酶(SOD,EC1.15.1.1)是第一个发现对清除自由基有突破性作用的酶。该酶可以催化以下反应：

O₂·^-+O₂·^-+2H⁺→O₂+H₂O₂

现有技术中的测定SOD酶活性的方法有很多，如非变性的聚丙烯胺凝胶分离结合NBT染色法(Leonowicz，PLoS One 2018),邻苯三酚的自动氧化分析法，细胞色素C还原分析法等(Attar，2006，Appl.Biochem.Microbiol.2006)。但这些方法都是通过对酶提取以后再间接测定SOD酶活性，操作繁琐。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种直观测定SOD酶活性的方法，能够直观测定SOD酶活性，无需破碎细胞提取酶液，操作简单。

本发明的目的是提供一种直观测定SOD酶活性的方法，将菌株接入液体培养基培养出发酵液后，将发酵液在含有能刺激细胞产生自由基的物质的固体培养基上进行点板，点板后将菌株培养至指数生长期，观察菌圈大小，菌圈越小，说明SOD酶活力越小。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，所述菌株为芽孢杆菌、细菌或者酵母。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，所述能刺激细胞产生自由基的物质为亚硒酸钠、百草枯或者维生素K₃。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，固体培养基中亚硒酸钠的浓度为1～5mM，百草枯的浓度为1～5mM，维生素K₃的浓度为1～5mM。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，当固体培养基的温度为50～90℃时，加入亚硒酸钠、百草枯或者维生素K₃并混匀，然后将培养基倒平板后备用。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，发酵液的制备方法如下：将菌株进行活化，然后按1～10ml/100ml或1～10g/100ml的接种量接种到种子培养基中，于25～37℃培养4～24h；然后将培养好的种子按5～10ml/100ml的接种量接入液体发酵培养基。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，芽孢杆菌所用种子培养基为LB培养基，pH自然；所用液体发酵培养基为LB培养基，培养基pH自然。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，种子培养于25～37℃好氧培养4～24h，在摇瓶中进行，摇床转速150～220r/min；发酵培养于25～37℃好氧培养4～24h。

优选的，所述直观测定SOD酶活性的方法，发酵液的点板量为2-10μL。

与现有技术相比，本发明提供的一种直观测定SOD酶活性的方法，至少具有以下有益效果：