[发明专利]一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用，所述调控德国小蠊性信息素合成的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因片段核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。将以该片段为模板合成的dsRNA导入雌性德国小蠊体内，可显著抑制CYP4PC1基因的表达水平，导致甲基酮类性信息素合成减少，最终使得德国小蠊部分雄虫个体求偶行为消失，本发明为基于蟑螂交配和繁殖的治理策略提供了具有潜力的分子靶标。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用。

背景技术

德国小蠊是蜚蠊目中最为常见的世界性家居害虫之一，其体型较小，常栖于缝隙和角落，可广泛传播多种病原微生物、携带大量过敏原并诱发哮喘，严重威胁人类健康。由于德国小蠊具有顽强的生命力和惊人的繁殖力，雌虫经单次交配后可多次产卵，每粒卵鞘可孵出约40头若虫，这种超强的繁殖力常使得其种群数量在短时期内快速增长。此外，德国小蠊食性杂，对常用农药容易产生抗性。这些特点都对德国小蠊的有效防治提出了严峻挑战。

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的靶标基因沉默机制，具有高度的序列特异性，基于RNAi技术的害虫防治策略具有专一性，且对非靶标生物安全。基于RNAi技术的害虫防治策略核心是寻找关键的分子靶标基因并获得特异高效的dsRNA片段序列。德国小蠊的生殖方式为两性生殖，其两性的交配行为必须以雄虫求偶为前提。雌虫体表的接触性性信息素直接调控雄虫求偶行为并决定两性的成功交配。基于RNAi技术干扰德国小蠊性信息素合成的关键步骤，可以为着眼于交配繁殖及种群扩张的治理策略开辟新的途径。

细胞色素P450是一类蛋白超家族，广泛参与着内源性生理物质的合成代谢，催化异源物质如杀虫剂、植物次生物质的降解等。然而，关于细胞色素P450参与德国小蠊性信息素合成的控制作用尚未有相关报道。

发明内容

本发明的所要解决的第一个技术问题在于：提供一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因序列。

本发明的所要解决的第二个技术问题在于：提供一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因片段序列。

本发明的所要解决的第三个技术问题在于：提供上述基因片段的制备方法。

本发明的所要解决的第四个技术问题在于：提供基于上述基因片段设计的dsRNA。

本发明的所要解决的第五个技术问题在于：上述dsRNA的制备方法。

本发明的所要解决的第六个技术问题在于：上述dsRNA的应用。

为解决上述第一个技术问题，本发明采用的方案为：一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因(CYP4PC1基因)，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

为解决上述第二个技术问题，本发明采用的方案为：一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

为解决上述第三个技术问题，本发明采用的方案为：上述基因片段的制备方法，包括以下步骤：以含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的重组质粒为模板，设计特异引物进行PCR扩增后得到所述基因片段。

优选地，所述特异引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的下游引物。

为解决上述第四个技术问题，本发明采用的方案为：基于上述基因片段合成的dsRNA，所述dsRNA由正义链和反义链组成，所述正义链序列如SEQ ID No.4所示，所述dsRNA反义链序列为与SEQ ID No.4所示的序列反向互补的核苷酸序列。