[发明专利]一种从吴茱萸中分离咖啡酰葡萄糖酸系列位置异构体的方法

说明书

本发明提供了一种从吴茱萸中快速分离咖啡酰葡萄糖酸全系列位置异构体的方法，对吴茱萸进行水回流提取，样品快速处理，制备液相分离和纯化，同时采用低温和无氧保护的方法，一次性成功分离了咖啡酰葡萄糖酸的5种系列异构体，并且不需要二次纯化，因而具有分离效率高、节省溶剂和时间、有机溶剂耗费少等优点。

技术领域

本发明属于植物成分提取，尤其是中药中的有效成分的提取，更具体涉及从吴茱萸中分离全系列咖啡酰葡萄糖酸异构体的方法。

背景技术

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实。在从古至今多个经典的中医传统古籍中，吴茱萸都被描述为“有毒”或“有小毒”。前期研究中发现，其毒性的来源可能是咖啡酸和葡萄糖酸的缩合物。因此有必要对该系列化合物进行分离以做进一步研究。其中，咖啡酸和葡萄糖酸缩合产生咖啡酰葡萄糖酸。根据葡萄糖酸中羟基的位置不同(2-O-、3-O-、4-O-、5-O-和6-O-)，存在5种位置异构体。目前仅6-O-反式-咖啡酰葡萄糖酸(称为化合物5，结构式如下)成功从吴茱萸中分离得到。

已报道的6-O-反式-咖啡酰葡萄糖酸(化合物5)制备方法有两种：

(1)11kg吴茱萸粉碎，4.4L95％乙醇回流1h，提取4次，得醇提物2.3kg。将醇提物分散到1.5L水中，盐酸调节PH至3，依次用环己烷(3L,4次)，乙酸乙酯(3L，4次)萃取后，得到吴茱萸水提物。

采用D101大孔树脂柱分离吴茱萸水提物，依次用10％、30％、60％、95％乙醇水溶液洗脱，获得4个组分。10％乙醇洗脱组分使用硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇体系梯度洗脱获得48个组分，经过TLC薄层色谱检测后合并为3个组分，之后第3个组分在乙醇水溶液中放置析出，分离得到6-O-反式-咖啡酰葡萄糖酸(化合物5)。(Zhao,M.Y.；Yang,X.W.Two newacylgluconic acids from the nearly ripe fruits of Evodia rutaecarpa.J.AsianNat.Prod.Res.2008,10,769–773.)

(2)3kg吴茱萸水回流提取两次，水提物采用D101大孔树脂分离，首先用95％乙醇洗脱杂质，然后用1％甲酸水溶液洗脱。洗脱液蒸发浓缩得粗提物197g。取40g粗体物，采用葡聚糖凝胶LH-20柱分离，依次用甲醇-水90：10得1-22号组分，100：0洗脱得23-38号组分。9-38号组分(35g)采用ODS柱色谱分离，依次用10％、15％、20％、30％、40％、50％甲醇洗脱，得76个组分，其中12-36号组分采用制备液相，甲醇-0.1％甲酸(23％-30％，30min)梯度洗脱，纯化分离得到6-O-反式-咖啡酰葡萄糖酸(化合物5)。(He,Y.；Li,J.；Wu,H.H.；Chai,X.；Yang,J.；Wang,Y.F.；Zhang,P.；Zhu,Y.；Gao,X.M.A new caffeoylgluconic acidderivative from the nearly ripe fruits of Evodiarutaecarpa.Nat.Prod.Res.2015,29,1243–1248.)

上述两篇现有技术仅能分离6-O-反式-咖啡酰葡萄糖酸(化合物5)，且吴茱萸提取后，提取物采用大型D101大孔树脂柱色谱粗分，然后合并流分，然后再进一步纯化得到。整个过程工艺繁琐、耗费时间长、消耗溶剂量大，也不能分离出化合物1至4。结构式如下：