[发明专利]一种从吴茱萸中分离咖啡酰葡萄糖酸系列位置异构体的方法

权利要求书

1.一种从吴茱萸中快速分离咖啡酰葡萄糖酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1) 对吴茱萸粉碎进行回流提取，在提取液浓缩后加入甲醇，超声处理后过滤；

2) 对滤液回收溶剂，干燥得固体；

3）用甲醇对其进行溶解，离心收集沉淀，干燥得固体粉末；

4）对上述样品进行液相色谱分离，其中流动相乙腈（A）-3%甲酸水，梯度洗脱：0-26min，7%A；26-27min，7%-9% A；27-40min 9% A；

其中，分别于分别于13.07-14.70 min，优选的13.58-13.88 min；16.36-17.92 min，优选的16.80-17.24 min；19.76-21.67 min，优选的20.26-20.86 min；25.57-27.52 min，优选的26.10-26.88 min；30.31-33.04 min，优选的30.81-32.22 min收集流分即得到化合物1、2、3、4、5的液相色谱纯化液；

所述化合物 1：2-O-反式咖啡酰葡萄糖酸、化合物 2：3-O-反式咖啡酰葡萄糖酸、化合物 3：4-O-反式咖啡酰葡萄糖酸、化合物 4：5-O-反式咖啡酰葡萄糖酸、化合物 5：6-O-反式咖啡酰葡萄糖酸；

任选地，进一步地，还包括下述步骤：

5）样品溶液在无氧条件下低于25 ℃的环境下进行干燥。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

其中，在第1）步中，所述回流提取是水提，进一步重复提取1-3次，在提取液浓缩后按1：3-5加入甲醇；超声处理条件为35 kHz超声25-40 min；过滤采用滤纸过滤，优选重复3次。

3.如权利要求1所述的方法，其中，在第2）和/或第3）步中，所述干燥是旋转蒸发回收溶剂至干。

4.如权利要求1所述的方法，其中，在第3）步中，采用4-10%甲醇溶解，按1：8-10体积比加入甲醇，离心条件是3500至4500 rpm，收集沉淀，干燥选择旋转蒸发至干。

5.如权利要求1所述的方法，其中第4)步所述无氧是通过氮气保护，低温保护是指处于0-8 ℃，优选0-6℃，最优选为4℃环境下。

6.如权利要求1所述的方法，其中第4)步，所述无氧和低温保护是指通过氮气保护，接收瓶置于冰水浴中。

7.如权利要求6所述的方法，其中无氧和低温保护的具体操作如下：将接收烧瓶连接真空接引管并预充氮气，置冰水浴中，真空接引管用橡胶塞封口，橡胶塞穿过一根PTFE进液管，真空接引管的抽真空口接充部分氮气的气球，并通过六通阀来控制制备液相的流出液体的排入废液和无氧接收之间的切换。

8.如权利要求1所述的方法，其中第5)步具体操作是：所述样品溶液在氮气保护下15-23℃水浴旋转蒸发至干，然后用氮气吹扫以完全除去残留的水分和甲酸，充氮气密封低温保存。

9.如权利要求8所述的方法，其中第5)步具体操作是：样品溶液氮气保护下在20℃水浴旋转蒸发至干，然后5 mL/min 氮气吹扫30 min以完全除去残留的水分和甲酸，充氮气密封于-20℃保存。