[发明专利]当归质量的检测方法

权利要求书

1.一种当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括如下步骤：

(1)采用液相质谱联用技术UPLC/Q-TOF-MS建立不同产地当归的指纹图谱，并结合传统中药数据库，筛选当归的药效成分群；所述液相方法条件：采用C18色谱柱；流动相是按照体积比组成的0.1％甲酸-水溶液与乙腈；流速为300μL/min，柱温为30℃，进样量为5μL，检测波长323nm，梯度洗脱参数：洗脱时间0-2min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；洗脱时间2-5min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从98％到85％；洗脱时间5-8min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从85％到70％；洗脱时间8-12min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从70％到50％；洗脱时间12-15min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从50％到33％；洗脱时间15-18min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从33％到20％；洗脱时间18-19min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从20％到0％；洗脱时间19-21min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为0％；洗脱时间21-22min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从0％到98％；洗脱时间22-25min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；

(2)将当归体外抗氧化、体内抗血虚功效指标作为当归质量的监测因子Y，将所述步骤(1)中当归药效成分群作为观测因子X，建立当归生物活性与药效成分群的偏最小二乘回归模型，确定当归生物活性呈正相关且相关系数较高的当归质量检测成分，将这些成分定为当归质量标志物；

(3)对步骤(2)中所确定的当归质量标志物，建立含量测定方法学并对方法进行验证。

2.如权利要求1所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(1)中的质谱方法条件如下：

B.质谱条件：离子源为电喷雾离子源，正负离子模式采集数据，正负离子源喷射电压分别为5500V、-4500V，雾化温度550℃，雾化气和辅助气为氮气，均为50psi，气帘气35psi，母离子扫描范围50～1600m/z，对超过100cps的8个最强峰进行MS²采集数据，子离子扫描范围为50～1500m/z。

3.如权利要求2所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法步骤(1)中的方法条件，确定了当归中22个指纹图谱所共有的特征峰，分别是欧当归内酯A、藁本内酯、洋川芎内酯A、5-甲氧基补骨脂素、绿原酸、异茴芹内酯、异虎耳草素、阿魏酸、二氢欧山芹醇当归酸酯、洋川芎内酯Ⅰ、6-羟基-7,8-二甲氧基香豆素、阿魏酸乙酯、东莨菪内酯、8-羟基补骨脂素、补骨脂素、芦丁、欧前胡素、芒柄花素、滨蒿内酯、亚油酸甲酯、二水槲皮素、莪术醇。

4.如权利要求2或3所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法步骤(1)中，筛选当归药效成分群的参数指标是脂水分配系数、口服生物利用度和成药性。

5.如权利要求4所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述方法筛选出的当归药效成分群为18个组分，分别是欧当归内酯A、藁本内酯、洋川芎内酯A、5-甲氧基补骨脂素、异茴芹内酯、阿魏酸、二氢欧山芹醇当归酸酯、洋川芎内酯Ⅰ、6-羟基-7,8-二甲氧基香豆素、阿魏酸乙酯、东莨菪内酯、8-羟基补骨脂素、补骨脂素、欧前胡素、芒柄花素、滨蒿内酯、二水槲皮素、莪术醇。

6.如权利要求5所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(2)中，当归体外抗氧化活性的检测指标是ABTS^+·自由基清除率％、DPPH^·自由基清除率％、羟自由基清除能力；所述的当归体内抗血虚功效的检测指标是谷胱甘肽过氧化物酶活性。

7.如权利要求6所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(2)中，所述当归质量标志物，其变量投影重要性指标VIP数值大于1。

8.如权利要求7所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法中，当归质量标志物为欧当归内酯A、藁本内酯和阿魏酸。

9.如权利要求8所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述质量标志物的含量测定方法学建立和验证包含的条件如下：

试品溶液的制备方法：称取当归粉末0.2g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入20mL70％甲醇，称定重量，85℃水浴回流30min，静置放冷，称定重量，加入溶剂补足减少的重量，摇晃均匀后静置，取上清液过滤，取续滤液备用；

混合对照溶液的制备方法：取阿魏酸、欧当归内酯A和藁本内酯对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成质量浓度分别为0.1、0.2和0.1mg/mL的混合对照溶液，即得；

液相条件：采用C₁₈色谱柱；流动相是按照体积比组成的0.1％甲酸-水溶液与乙腈；流速为300μL/min，柱温为30℃，进样量为5μL，检测波长323nm，梯度洗脱参数：洗脱时间0-2min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；洗脱时间2-5min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从98％到85％；洗脱时间5-8min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从85％到70％；洗脱时间8-12min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从70％到50％；洗脱时间12-15min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从50％到33％；洗脱时间15-18min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从33％到20％；洗脱时间18-19min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从20％到0％；洗脱时间19-21min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为0％；洗脱时间21-22min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从0％到98％；洗脱时间22-25min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；

质谱条件：定量质谱分析采用ESI正离子模式进行扫描，检测模式为多反应监测，离子化参数为离子喷雾电压，正离子模式+5500v；雾化温度550℃，雾化气和辅助气为氮气，均为50psi，气帘气35psi；

3种当归质量标志物检测方法的线性范围为：0.38～380.00μg/mL。