[发明专利]一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法

说明书

本发明公开了一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，包括如下步骤：愈伤组织分化培养、愈伤组织继代培养、生根培养、炼苗移栽。本发明还公开了一种甘草花药愈伤组织分化培养基，其成分包括大量元素，微量元素，铁盐乳酸亚铁，有机成分肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、赖氨酸、组氨酸、精胺、阿拉伯半乳糖蛋白，生长调节剂ZT、NAA、三十烷醇，附加成分1‑甲基环丙烯、5‑氮杂胞苷、苜蓿水提液，以及蔗糖和结冷胶。采用本发明的方法，甘草花药愈伤组织的平均分化率为32.13%，与现有技术相比有了显著提高，对于提高甘草花药培养效率、进一步开展甘草单倍体育种工作具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法。

背景技术

甘草（Licorice）又名甜草根、粉草、国老等，为豆科、蝶形花亚科、甘草属多年生草本植物，根与根状茎粗状，直径1-3厘米，外皮褐色，里面淡黄色，具甜味。甘草以干燥的根及根茎入药，具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效，常用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。甘草在全世界约有29种6变种，我国约有18种3变种。据《中华人民共和国药典》记载，甘草药材原植物有3种，即乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、胀果甘草 （Glycyrrhiza inflata Bat.）和光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）。此外，我国还有刺果甘草、黄甘草、云南甘草等品种。乌拉尔甘草广泛分布于西北各省区，如内蒙古、甘肃、宁夏、新疆、青海、山西、陕西等，甚至在东北地区也有乌拉甘草分布，其天然蕴藏量大、分布范围广，同时也是医药界使用最多的甘草品种，因此乌拉甘草通常也被简称为甘草。胀果甘草又名膨果甘草，主产于我国新疆南疆地区和甘肃西北部。光果甘草又名欧甘草、欧亚甘草，仅分布于新疆、青海，产量与乌拉尔甘草、胀果甘草相比相对较少。作为一味常用大宗药材，甘草的化学成分及药理作用一直是国内外药理界的研究热点。研究表明，甘草最主要的化学成分是三萜类化合物和黄酮类化合物，其次还分离得到香豆素类、生物碱、多糖、有机酸、氨基酸等多种成分。有关甘草提取物及其主要成分的药理作用，国内外进行了大量的研究。 结果表明甘草存在抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、保肝、抗癌、抗疟原虫、保护神经中枢系统、保护心脑血管系统、抗肾损伤、治疗呼吸系疾病统、调节内分泌、增强免疫功能等诸多活性。除作为传统药材和现代医药原料外，甘草还可以作为矫味剂添加到糖果、饮料、香烟中，作为美白剂添加到化妆品中，作为表面活性剂以促进难吸收药物的吸收。

甘草多年来一直是国内外市场上的畅销产品。尤其是近20年来，甘草的销售量一直呈上升趋势。由于甘草价格高涨，造成人们对野生甘草的毁灭性采挖，不仅破坏了草原生态系统的良性循环，而且使野生甘草资源本身趋于枯竭。我国于20世纪80年代末开始进行甘草的人工驯化并取得成功。家种甘草主产区有甘肃、宁夏、内蒙、新疆，次产区有东北、河北、山西等。但目前市场上的甘草只有20%是人工种植的。制约甘草人工种植产业发展的关键在于栽培甘草完全来自野生，由于种内的遗传多样性造成基因型间差别很大，外形不够一致，径级差别明显，有效成分含量不一致和不稳定，给中药标准化生产加工和质量控制带来很大困难。与粮食和经济作物相比，我国药用植物基础研究还很薄弱，所以在很长一段时间内，我国的药用植物遗传育种工作主要还要依靠常规育种。系统选育和杂交育种培育出的新品种遗传性状相对稳定，安全性高，但培育周期过长，少则四五年，多则要十年以上，从而成为常规育种的瓶颈。

生物技术是21世纪发展最快、最有生命力的一门高技术前沿学科。生物技术的兴起为我国药用植物的研究及发展提供了机遇和手段。伴随着高等植物细胞工程、基因工程等生物技术的日趋成熟，药用植物的生产在数量和品质上都取得了显著的进步。药用植物生物技术育种手段主要包括组织培养、倍性育种、基因工程和分子标记技术等，将常规育种与这些生物技术育种手段相结合已成为药用植物育种发展的新趋势。