[发明专利]一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法

权利要求书

1.一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）愈伤组织分化培养：挑选合适的甘草花药愈伤组织接种至分化培养基上，每瓶接种3~5块，置于温度24~26℃、光照时间10~14h/d、光照强度1500~2000lx的条件下培养；

2）愈伤组织继代培养：在愈伤组织分化培养至25~30d时，将长势良好的愈伤组织继代到新鲜的分化培养基上，继续培养25~30d可分化出不定芽；

3）生根培养：当分化出的不定芽长至1~2cm时，将其切下转接到生根培养基上，每瓶接种 2~3 个不定芽，在光照条件下培养20~28d获得生根的试管苗；

4）炼苗移栽：当试管苗长出1~2cm根系时，先将瓶口打开，在培养箱炼苗2~3d，然后在培养室内炼苗3~4d；将炼苗后的试管苗从培养瓶中取出，用清水洗净残留在根部上的培养基，移栽到已经过灭菌的基质上，进行常规栽培管理。

2.根据权利要求1所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述步骤1）中甘草花药愈伤组织的挑选标准为：直径1~2mm左右，颜色呈现淡绿色，结构比较致密。

3.根据权利要求1所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述步骤1）中分化培养基的成分为：NH₄NO₃ 1050~1150mg/L，KNO₃ 1180~1300mg/L，KH₂PO₄·H₂O107~123mg/L，柠檬酸钙310~330mg/L，MgSO₄·7H₂O 160~180mg/L，MgCl₂100~120mg/L，MnSO₄·4H₂O 19~23mg/L，KI 0.80~0.86mg/L，H₃BO₃ 5.5~6.1mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.0~3.0mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2~0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，乳酸亚铁29.8~33.4mg/L，肌醇80~100mg/L，烟酸0.6~1.0mg/L，盐酸硫胺素8.5~9.5mg/L，盐酸吡哆醇0.8~1.2mg/L，赖氨酸2.0~3.0mg/L，组氨酸3.0~4.0mg/L，精胺20~30mmol/L，1-甲基环丙烯0.8~1.2mg/L，ZT 0.4~0.6mg/L，NAA 0.04~0.06mg/L，三十烷醇1.0~1.6mg/L，阿拉伯半乳糖蛋白190~210mg/L，5-氮杂胞苷36~44μmol/L，苜蓿水提液50~80ml/L，蔗糖25~35g/L，结冷胶9~11g/L，pH值调节为5.6~6.0。

4.根据权利要求1所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述步骤3）中生根培养基的成分为：1/2MS基本培养基+NAA 0.05mg/L+氯化胆碱3mg/L+蔗糖10g/L+结冷胶3.5g/L，pH值调节为5.6~6.0。

5.根据权利要求1所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述步骤3）中生根培养的条件为：温度23~27℃、光照时间12~16h/d、光照强度2000~3000lx。

6.根据权利要求1所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述步骤4）中培养室的温度保持在20~28℃，湿度保持在70~80%，自然光照。

7.根据权利要求3所述的一种甘草花药愈伤组织分化再生植株的方法，其特征在于，所述苜蓿水提液的制备方法为：将苜蓿植株剪碎后加入蒸馏水，每1500mL水中加入300g鲜品，充分浸泡48h后用4层纱布过滤，滤液置于4℃冰箱备用。