[发明专利]一种维生素B12的发酵法生产方法在审
| 申请号： | 201910746320.4 | 申请日： | 2019-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN110358797A | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 金鹏 | 申请（专利权）人： | 南京牧奇亚生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/42 | 分类号： | C12P19/42;C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京久维律师事务所 11582 | 代理人： | 邢江峰 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 发酵培养基 谢氏丙酸杆菌 发酵 悬浮生物填料 悬浮 发酵法生产 生产效率 种维生素 菌落 制备 维生素 制备发酵培养基 生产安全性 营养液 超声处理 充分接触 离心洗涤 温度影响 悬浮载体 厌氧发酵 发酵液 均匀性 赖氨酸 酶处理 附着 过滤 保证 生产 | ||
【说明书】：
本发明公开了一种维生素B12的发酵法生产方法，其包括如下步骤：步骤1)制备谢氏丙酸杆菌液；步骤2)制备悬浮发酵菌落；步骤3)制备发酵培养基；步骤4)混合悬浮发酵菌落与发酵培养基；步骤5)厌氧发酵生产维生素B12；步骤5)离心洗涤过滤悬浮载体；步骤6)提取和纯化；本发明创造性地使用悬浮生物填料技术，用于谢氏丙酸杆菌的附着，使其在发酵培养基中悬浮，与发酵培养基中的营养液充分接触，大大提高赖氨酸的生产效率，由于发酵温度相对较低，悬浮生物填料不会受温度影响而产生有害物质进入发酵液中，保证了维生素B12的生产安全性；2.本发明进一步利用超声处理和酶处理进一步提高发酵培养基均匀性和一致性，提高谢氏丙酸杆菌的生产效率。
技术领域
本发明涉及维生素B12生产技术领域，具体是一种维生素B12的发酵法生产方法。
背景技术
维生素B12(Vitamin B12)为B族维生素之一，是一类含钴的复杂有机化合物。分子结构是以钴离子为中心的咕啉环和5,6-二甲基苯并咪唑为碱基组成的核苷酸。
维生素B12又称钴胺素或氰钴素，是一种重要的动物和人类营养因子，广泛应用于饲料、食品和医药卫生领域，其在很多方面都有显著作用，如促进红细胞的发育和成熟，预防恶性贫血；维护神经系统健康；以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；也可促进蛋白质的合成，对婴幼儿的生长发育有重要作用；还能消除烦躁不安、集中注意力、增强记忆及平衡感，而且维生素B12参与神经组织中一种脂蛋白的形成，是神经系统功能健全不可缺少的维生素。
采用化学合成生产维生素B12的方法成本高，副产物多，难以提纯。维生素B12的工业制造主要是通过微生物发酵法制得，应用于工业生产的菌株主要有厌氧费氏丙酸杆菌、谢氏丙酸杆菌及耗氧的脱单假单孢杆菌。通过厌氧发酵生产维生素B12的产率较低，究其原因，产维生素B12菌株与培养液混合后极易附着在发酵罐的侧壁上，从而与发酵培养基的营养液不充分接触，导致产维生素B12菌株的生产效率低，因此，急需研究一种维生素B12的发酵法生产方法，提高维生素B12的生产效率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种维生素B12的发酵法生产方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种维生素B12的发酵法生产方法，该方法包括如下步骤：
步骤1)制备谢氏丙酸杆菌液；
步骤2)制备悬浮发酵菌落；
步骤3)制备发酵培养基；
步骤4)混合悬浮发酵菌落与发酵培养基；
步骤5)厌氧发酵生产维生素B12；
步骤5)离心洗涤过滤悬浮载体；
步骤6)提取和纯化。
优选的，所述步骤1)制备谢氏丙酸杆菌液，包括如下步骤：将谢氏丙酸杆菌液接入菌液培养基中，培养至密度为(3-5)108cfu/mL的菌液；所述菌液培养基的组分为:葡萄糖80g/L，酵母膏30g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾2g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，七水硫酸镁0.2g/L，生物素10mg/L，维生素B1 2mg/L。
优选的，所述步骤2)制备悬浮发酵菌落，包括如下步骤：将悬浮生物填料添加至所述的谢氏丙酸杆菌液中，让谢氏丙酸杆菌附着在所述的悬浮生物填料上，形成悬浮发酵菌落。
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