[发明专利]人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料、制备方法及应用

说明书

本发明公开了人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料、制备方法及应用，本发明将LGI1抗原包被于载体膜上制成抗LGI1受体检测材料，人血清和脑脊液中的特异性LGI1抗体会与抗原结合，利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色，并在显色反应中加入本发明的封闭材料，可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有LGI1抗体。该方法具有灵敏度高，操作简便，快速检测等优点，有助于抗LGI1受体脑炎的识别和诊断。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料、制备方法及应用。

背景技术

富亮氨酸胶质瘤失活1蛋白(leucine-rich glioma inactivated 1,LGI1)可以调节电压门控钾通道的活性，并且可以参与神经元生长调节和细胞存活。与LGI1相关的疾病包括Isaacs’s综合症，癫痫，家族性颞叶，具有听觉特征的常染色体显性遗传性癫痫及抗LGI1自身免疫边缘性脑炎(以下简称为抗LGI1脑炎)。

Meizan Lai等人于2010年，通过免疫组化法，对57位抗VGKC脑炎患者的血液和脑脊液进行检测，结果发现约有41％的患者检测到了抗LGI1抗体，因此他建议将抗VGKC脑炎正式更名为抗LGI1脑炎。2016年van Sonderen A等人的研究表明，相较于脑脊液，抗LGI1抗体在血清中更易被检出，脑脊液和血清的检出率分别是88％和100％，这是抗LGI1脑炎和其他自身免疫脑炎的不同之处。我国首例抗LGI1脑炎于2012年由北京协和医院报道，神经学影像学检查表明，抗LGI脑炎患者表现为颞叶内侧信号受累，而血清抗LGI1抗体是确诊依据。

目前常用的检测手段有免疫荧光、ELISA、免疫印迹、免疫组化等方法，这些方法普遍存在检测过程耗时较长，步骤繁琐，抗体需求量大，成本高，灵敏度不高等缺点，利用这些方法很难一次性对大批量样本同时检测或针对某一个样本进行反复检测。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种对LGI1自身抗体进行检测的检测材料、该材料的制备方法及应用，解决现有的检测方法检测耗时长、步骤繁琐、抗体需求量大、成本高、灵敏度低等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，获取LGI1的CDS序列及其信号肽序列作为目的基因，将带有酶切位点的两个目的基因分别插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-LGI1；

其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；

步骤2，将重组质粒载体17T2A-LGI1转染入293T细胞中，得到17T2A-LGI1-293T细胞；

步骤3，裂解17T2A-LGI1-293T细胞，提取其胞浆蛋白，使用PEG沉淀法提取胞浆蛋白中的LGI1抗原；

步骤4，将步骤3提取得到的LGI1抗原固化在载体膜上，得到人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料。

具体的，所述的步骤1具体包括以下步骤：

步骤1.1：通过人工合成或者PCR方法获得LGI1的CDS序列及其信号肽序列作为目的基因，在两个目的基因两端均加设SalI/NotI的酶切位点；

步骤1.2：将带有酶切位点的两个目的基因插入17T2A质粒载体中，插入位点为SalI/NotI，得到重组质粒，将该重组质粒命名为17T2A-LGI1；