[发明专利]人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料、制备方法及应用

权利要求书

1.人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，获取LGI1的CDS序列及其信号肽序列作为目的基因，将带有酶切位点的两个目的基因分别插入17T2A质粒载体中，得到重组质粒载体17T2A-LGI1；

其中，17T2A质粒载体包括含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列、原核复制子pUC Ori序列、病毒复制子SV4 0O ri序列、RSV启动子、慢病毒5’LTR、慢病毒3’LTR、Gag顺式元件、RRE顺式元件、env顺式元件、cPPT顺式元件、eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件、CMV启动子、MCS多克隆位点以及T2A元件；

步骤2，将重组质粒载体17T2A-LGI1转染入293T细胞中，得到17T2A-LGI1-293T细胞；

步骤3，裂解17T2A-LGI1-293T细胞，提取其胞浆蛋白，使用PEG沉淀法提取胞浆蛋白中的LGI1抗原；

步骤4，将步骤3提取得到的LGI1抗原固化在载体膜上，得到人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料。

2.如权利要求1所述的人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，所述的步骤1具体包括以下步骤：

步骤1.1：通过人工合成或者PCR方法获得LGI1的CDS序列及其信号肽序列作为目的基因，在两个目的基因两端均加设SalI/NotI的酶切位点；

步骤1.2：将带有酶切位点的两个目的基因插入17T2A质粒载体中，插入位点为SalI/NotI，得到重组质粒，将该重组质粒命名为17T2A-LGI1；

步骤1.3：对重组质粒17T2A-LGI1进行测序，将测序正确的带有目的基因的菌种扩大培养后进行质粒提取，得到重组质粒载体17T2A-LGI1。

3.如权利要求1所述的人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，所述的步骤2中使用PEI转染方法、lipofectamin2000、lipofectamin3000、lipA或电转法将17T2A-LGI1转染入293T细胞中，其中，电转条件为1500V～2000V、25μF、200Ω。

4.如权利要求1所述的人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，所述的载体膜为硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜、具有蛋白吸附能力的玻片、塑料材质的细胞培养皿或培养板。

5.权利要求1至4任一项所述的制备方法制备的人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料，其特征在于，该检测材料包括载体膜和固化在载体膜上的从17T2A-LGI1-293T细胞提取的膜蛋白-细胞膜复合物。

6.将权利要求1至5任一项所述的人体液中抗LGI1自身抗体的检测材料用于检测样品中的LGI1抗体。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，检测样品中的LGI1抗体的检测过程具体包括：将待检测样品和封闭材料混合后孵育，孵育后加入到权利要求1至6任一项所述的抗LGI1自身抗体的检测材料中再次孵育，洗涤，加入AP标记羊抗人IgG二抗孵育后进行底物显色；

其中，封闭材料包括经过处理的载体膜和固化在处理后载体膜上的17T2A-293T细胞蛋白；所述的载体膜的处理过程为：将载体膜加入蔗糖与葡萄糖按照体积摩尔浓度比为1:1比例混合的混合试剂中，在100℃烘干20-30min或者37℃烘干8～16h。