[发明专利]一种白鳍鲨的MsrA基因、蛋白质与基因提取的方法

说明书

本发明公开一种白鳍鲨的MsrA基因、蛋白质与基因提取的方法，所述MsrA基因的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No：1所示。本发明在不需要对白鳍鲨基因全测序的条件下便能提供具有针对性的MsrA基因序列，提高了非模式生物基因克隆的效率；同时，本发明的白鳍鲨MsrA蛋白酶表达量及纯化度高，且在后续的研究中发现其在体内亦或是在体外都具有显著的修复甲硫氨酸氧化受损的功能。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种白鳍鲨的MsrA基因、蛋白质与基因提取的方法。

背景技术

蛋白质中的含硫氨基酸甲硫氨酸是很容易被氧化的氨基酸之一，甲硫氨酸被氧化之后产生S型和R型两种甲硫氨酸亚砜，前者可以特异地被甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)还原为甲硫氨酸。MsrA一般定位于线粒体中，因其重要的抵抗氧化应激和蛋白修复作用而成为生物体抗氧化系统中的重要成员。MsrA出现于30亿年前，在进化上非常原始。鲨鱼是一种原始的海洋生物，在进化上高度保守，健康鲨鱼终生游动，推测其可能具有更强大的抗氧化系统。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白鳍鲨的MsrA基因、蛋白质与基因提取的方法，以解决现有存在的由于白鳍鲨全基因序列还未被测定而无法获取其MsrA基因序列、蛋白序列及蛋白表达的问题。

本发明的技术方案如下：

一种白鳍鲨的MsrA基因，其中，所述MsrA基因的核苷酸序列如序列表中的SEQ IDNo：1所示。

所述的白鳍鲨的MsrA基因，其中，所述白鳍鲨的MsrA cDNA全长为1207bp。

所述的白鳍鲨的MsrA基因，其中，所述白鳍鲨的MsrA基因中，5’UTR为20bp，带有Ploy A尾巴的3’UTR长503bp，ORF为684bp。

所述的白鳍鲨的MsrA基因，其中，所述白鳍鲨的MsrA基因编码227个氨基酸。

一种表达本发明所述白鳍鲨的MsrA基因的蛋白质，其中，所述蛋白质的氨基酸序列如序列表中的SEQ ID No：2所示。

一种白鳍鲨的MsrA基因提取方法，其中，包括步骤：根据白鳍鲨肝脏总蛋白质谱分析所得的肽段，设计上下游简并引物，进行cDNA克隆，通过3’RACE和5’RACE法来获得两末端序列，并将得到的序列进行拼接，得到白鳍鲨的MsrA基因。

所述的白鳍鲨的MsrA基因提取方法，其中，具体包括步骤：

从白鳍鲨的肝脏组织中提取总RNA；

以所述总RNA为模板进行反转录获得cDNA；

设计上下游简并引物，以获得的cDNA为模板，进行PCR扩增，得到扩增产物；

将得到的扩增产物进行序列测定，将测定结果进行核酸BLAST比对，得到白鳍鲨的MsrA基因片段；

通过3’RACE和5’RACE法获得MsrA基因的两末端序列，将得到的序列进行拼接，得到白鳍鲨的MsrA基因。

有益效果：本发明在不需要对白鳍鲨基因全测序的条件下便能提供具有针对性的MsrA基因序列，提高了非模式生物基因克隆的效率；同时，本发明的白鳍鲨MsrA蛋白酶表达量及纯化度高，且在后续的研究中发现其在体内亦或是在体外都具有显著的修复甲硫氨酸氧化受损的功能。

附图说明

图1为白鳍鲨肝组织提取的总RNA图。

图2为菌液鉴定PCR电泳图。

图3为MsrA的多序列比对图。

图4为总蛋白SDS-PAGE图。

图5为纯化蛋白的SDS-PAGE图。