[发明专利]适配体功能材料及其制备方法和在AFs检测中的应用

说明书

本发明属于霉菌毒素检测技术领域，具体涉及一种适配体功能材料及其制备方法和在AFs检测中的应用。该适配体功能材料包括：羧基微球以及结合在所述羧基微球表面的5’‑NH₂‑Biotin‑T_18‑22‑ACTGCTAGAGATTTTCCACAT‑3’；其中，所述羧基微球表面的羧基与氨基形成酰胺键，T_18‑22为18‑22个T碱基。该适配体功能材料对AFs具有高度特异性识别结合作用，而且吸附容量高、吸附稳定好，在AFs检测和分析中具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于霉菌毒素检测技术领域，具体涉及一种适配体功能材料及其制备方法和在AFs检测中的应用。

背景技术

核酸适配体(Aptamer)能与靶物质特异性亲和结合，当Aptamer与靶物质靠近时，能够通过弯曲盘旋折叠、链内碱基互补配对形成特殊的立体结构(发夹、茎环、假节、凸环、G-四分体等)，这些立体结构是Aptamer与靶物质亲和作用的结构基础，具有特异性识别功能；靶物质或靶物质的一部分恰好能进入到立体结构中，在立体结构中具有某些特异性识别位点，能通过假碱基堆积、氢键作用及静电作用等作用力与靶物质亲和作用。近年来有关于Aptamer在目标物的色谱纯化中应用的报道。

黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)在粮食谷物中分布面广、检出率高、产毒量大且毒性强而引起关注。针对黄曲霉毒素的检测方法中应用较广的是ELISA、HPLC及HPLC-MS法，但是由于食品基质复杂多样且霉菌毒素含量甚微，因此需要合适的前处理手段从样品中富集纯化霉菌毒素，如固相萃取技术。然而，传统的固相萃取材料受到了吸附选择性和吸附容量的限制，目前应用最多的免疫亲和柱价格昂贵、不易生产修饰且容易失活，因此新型的霉菌毒素吸附材料的研发成为了迫切求。

AFs是一类具有二氢呋喃氧杂萘邻酮结构的类似物，其中以黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)在粮食谷物中较为常见，黄曲霉毒素M1(AFM1)和黄曲霉毒素M2(AFM2)为B族AFs在动物体内的代谢物，动物源性食品中常常检出；如AFM1属于黄曲霉毒素一类结构类似的化合物中的一种，可引起人和动物的多种毒性反应以及致癌、致畸、致突变，其能在畜禽体内积蓄残留，经食物链传递进而危害人体健康，带来严重的食品安全问题。因此，对针对AFs的选择吸附材料的研发更为迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适配体功能材料及其制备方法和在AFs检测的应用，旨在解决现有AFs的特异性选择吸附材料有限的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种适配体功能材料，所述适配体功能材料包括：

羧基微球以及结合在所述羧基微球表面的5’-NH₂-Biotin-T_18-22-ACTGCTAGAGATTTTCCACAT-3’；其中，所述羧基微球表面的羧基与氨基形成酰胺键，T_18-22为18-22个T碱基。

本发明提供一种特异性选择吸附AFs的适配体功能材料，在该适配体功能材料中，以羧基磁珠为载体材料，用特异性吸附AFs的核酸适配体作为功能单体，且以T_18-22作为核酸适配体的5’端连接臂，通过羧基和氨基形成的酰胺键连接形成；这样的适配体功能材料具有很好的结构稳定性，同时通过试验证明，其仅对AFs具有高度特异性识别结合作用，而且吸附容量高、吸附稳定好，在AFs检测和分析中具有很好的应用前景。

本发明另一方面提供一种适配体功能材料的制备方法，包括如下步骤：

提供羧基微球，将所述羧基微球分散于缓冲液中，得到羧基微球分散液；

在所述羧基微球分散液中加入NHS和EDC进行羧基活化，得到中间体；