[发明专利]一种卵黄免疫球蛋白的检测方法

说明书

本发明涉及一种卵黄免疫球蛋白的检测方法，包括以下步骤：(1)将配制好的浓缩胶进行灌胶，将变性后的已知浓度的蛋白样品分别加入多个上样孔中；(2)将上样后的蛋白样品进行电泳；(3)将电泳后的整块胶放置于活化后的固相支持物上，然后转移至加有冰块的转膜缓冲液中，进行转膜；(4)将转膜后的固相支持物进行封闭；(5)将封闭后的固相支持物进行清洗，然后用含有HRP的IgY抗体进行抗体敷育；(6)将抗体敷育后的固相支持物进行清洗，然后采用ECL显色液进行显色，并采用化学发光显影仪进行显影成像；(7)将显影成像获得的图片进行灰度分析。本发明的IgY的检测方法不仅可对IgY的含量进行检测，还可对其纯度进行分析。

技术领域

本发明涉及免疫球蛋白的检查技术，特别涉及一种卵黄免疫球蛋白(IgY)的检测方法。

背景技术

卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，IgY)是卵黄当中唯一的免疫球蛋白，普遍存在于鸟类、爬行动物和两栖类，在功能上等价于哺乳动物免疫球蛋白IgG。IgY产生快、产量多、效价高、理化性质稳定、来源广、本身无毒副作用，所以它是很好的特医食品原料。目前IgY的提取方法有水稀释法、硫酸铵提取、聚乙二醇法、葡聚糖硫酸盐法、黄原胶法、冷乙醇分级分离法以及水稀释超滤法等。一般IgY提取之后，再采用凝胶层析或离子交换层析等方法进行纯化。较为常用的IgY检测方法为ELISA检测方法，也称酶联免疫吸附实验，测量时，抗原(抗体)先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

现有的IgY的检测方法中，仅能对IgY的生物活性进行定性，而其纯度、特异性及含量无法准确分析，且存在检测精确度低、重复性差等不足。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种IgY的检测方法，不仅能对IgY生物活性进行定性，对其含量及纯度可进行检测分析。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种卵黄免疫球蛋白的检测方法，包括以下步骤：

(1)将配制好的浓缩胶进行灌胶，待浓缩胶凝固后，将制胶板转移至电泳槽中，加满电泳缓冲液后取下梳子，将变性后的已知浓度的蛋白样品分别加入多个上样孔中，且每个上样孔中的蛋白样品的含量相同；

(2)将步骤(1)上样后的蛋白样品进行电泳；

(3)将步骤(2)电泳后的整块胶放置于活化后的固相支持物上，然后转移至加有冰块的转膜缓冲液中，进行转膜；

(4)将步骤(3)转膜后的固相支持物进行封闭；

(5)将步骤(4)封闭后的固相支持物进行清洗，然后用含有HRP的抗IgY抗体进行抗体敷育；

(6)将步骤(5)抗体敷育后的固相支持物进行清洗，然后采用显色液进行显色，并采用化学发光显影仪进行显影成像；

(7)将步骤(6)显影成像获得的图片进行灰度分析。

本发明的有益效果在于：

(1)本申请的IgY的检测方法中，利用抗原抗体杂交原理，采取Western blot技术对蛋白样品中IgY生物活性进行鉴定，对其含量及纯度进行分析。一方面，本申请于步骤(6)化学发光显影后，通过条带鉴定蛋白样品中是否含有IgY成分；另一方面，本申请于步骤(7)灰度分析后，通过样品IgY与标准品含量比较，进而可以测定IgY的含量；