[发明专利]重组修饰的猪传染性胃肠炎病毒弱毒株及其应用在审
| 申请号： | 201910728643.0 | 申请日： | 2019-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN110468112A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 冯力;陈建飞;朱向东;张鑫;时洪艳;石达;刘建波 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/63;C12N15/12 |
| 代理公司： | 11400 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 方挺;黄谦<国际申请>=<国际公布>=< |
| 地址： | 150069 黑龙江省哈尔滨市香坊*** | 国省代码： | 黑龙;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 感染性克隆 弱毒株 构建 猪传染性胃肠炎病毒 病毒 表达外源基因 基本骨架 研究对象 重组质粒 | ||
1.一种表达和生产TGEV-H165病毒的方法，其特征在于该方法以pBeloBAC11为载体，利用线性表达构建体重构TGEV-H165病毒粒子。
2.如权利要求1所述方法，其特征在于，将TGEV-H165病毒基因组全长序列分为6个片段，每个片段长度控制在4-8kb左右，分别插入pBeloBAC11质粒载体中。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在质粒载体中进一步含有报告基因GFP。
4.如权利要求1-3任一项所述方法，其特征在于，在转染时，控制质粒纯度(OD260/OD280)在1.8到2.0之间。
5.如权利要求4所述方法，其特征在于，在转染时，质粒浓度为100-200ng/μl之间。
6.一种TGEV-H165病毒的拯救方法，其特征在于该方法通过分析TGEV-H165病毒基因组和pBeloBAC11载体序列，确定TGEV-H165病毒基因组的克隆位点，并进一步分段扩增，插入pBeloBAC11质粒载体中，获得重组病毒的全长序列，经转染培养获得稳定传代的拯救病毒。
7.一种重组猪传染性胃肠炎病毒弱毒株[rTGEV(a)-H165]，其微生物保藏号：CGMCCNo.17495。
8.一种表达绿色荧光蛋白重组猪传染性胃肠炎病毒弱毒株[rTGEV(H165)-GFP]，其微生物保藏号：CGMCC No.17497。
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