[发明专利]一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法，包括PVC底板，所述PVC底板的顶部从左到右依次设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫。本发明通过对导致人体腹泻的最主要的两种水源性寄生虫(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)的检测，一次加样，可以同时获得两个结果，不仅提高检出率，同时也对病因进行了鉴别，且其灵敏度高、特异性强、速度快(5‑10min)、操作简便、重复性好、结构稳定、使用性能好，适用于临床检测或普查等多种场合，供外出期间或在外住宿或就餐后存在低烧或腹泻病人快速筛查，确认是何种原因导致的腹泻，可以对治疗和用药给出诊断依据。

技术领域

本发明涉及腹泻检测技术领域，具体为一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法。

背景技术

隐孢子虫为体积微小的球虫类寄生虫，广泛存在多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐孢子虫，由微小隐孢子虫引起的疾病称隐孢子虫病，是一种以腹泻为主要临床表现的人畜共患性原虫病，人体因摄人被隐孢子虫卵囊污染的饮水、食物和娱乐用水，或与宠物、家畜等动物和野生动物等密切接触而感染。

贾第鞭毛虫简称贾第虫，寄生人体小肠、胆囊主要在十二指肠，可引起腹痛、腹泻和吸收不良等症状，由于旅游事业的发展，在旅游者中发病率较高，故又称旅游者腹泻。

隐孢子虫和贾第鞭毛虫被认为是世界上最主要的引起人体腹泻的水源性寄生虫，新版《生活饮用水标准》在微生物标准中增加了两虫的检验，两虫主要寄生于人和动物体内的肠道，引起腹泻为主要表现的人畜共患性原虫病，且致病剂量低，贾第鞭毛虫为10-100个活包囊，隐孢子虫为1-10个卵囊。

目前检测技术有三类：形态学检查、核酸检测(PCR)和抗原检测三类方法，其中形态学检查的优点是快速简便直接，但病原虫数量少时不易观察；核酸检测程序繁琐，标本预处理工序多，受引物设计、核酸纯化、反应条件等限制，仅限于实验室操作，易受到实验室污染而出现假阳，必须在独立的空间进行样品处理和检验；抗原检测法反应特异性强，方便快速，但其检测效率低，为此，我们提出一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂，包括PVC底板，所述PVC底板的顶部从左到右依次设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫，且硝酸纤维素膜检测垫的内表面从左到右依次设置有隐孢子虫检测线、贾第鞭毛虫检测线和质控线，所述胶体金标记垫的左侧位于样品垫的内侧，且硝酸纤维素膜检测垫的左侧位于胶体金标记垫的内侧，硝酸纤维素膜检测垫的右侧位于吸水垫的内侧。

优选的，所述胶体金标记垫的材质为聚酯膜，样品垫材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。

一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其制备方法包括以下步骤：

A、制备样品垫：将样品垫置于处理液中浸泡，然后将含有处理液的样品垫置于温度为18-24℃、相对湿度小于40％的环境中烘干16-24h，备用；

B、制备胶体金标记垫：胶体金溶液、抗体标记及胶体金标记垫制备；

C、制备硝酸纤维素膜检测垫：①、按照配方要求配置好质控线、隐孢子虫检测线和贾第鞭毛虫检测线的抗体溶液，且最终抗体溶液浓度为1.0-1.2mg/ml；②取硝酸纤维素膜(规格宽度25mm)，按照距离间隔一次性划出隐孢子虫检测线、贾第鞭毛虫检测线和质控线，划膜时，抗体溶液的消耗量设定为1.0-1.2ul/cm，隐孢子虫检测线包被有鼠抗隐孢子虫单克隆抗体3，贾第鞭毛虫检测线包被有鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体4，质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；