[发明专利]一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂，包括PVC底板(1)，其特征在于：所述PVC底板(1)的顶部从左到右依次设置有样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜检测垫(4)和吸水垫(6)，且硝酸纤维素膜检测垫(4)的内表面从左到右依次设置有隐孢子虫检测线(8)、贾第鞭毛虫检测线(7)和质控线(5)，所述胶体金标记垫(3)的左侧位于样品垫(2)的内侧，且硝酸纤维素膜检测垫(4)的左侧位于胶体金标记垫(3)的内侧，硝酸纤维素膜检测垫(4)的右侧位于吸水垫(6)的内侧。

2.根据权利要求1所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂，其特征在于：所述胶体金标记垫(3)的材质为聚酯膜，样品垫(2)材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。

3.一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：

A、制备样品垫(2)：将样品垫(2)置于处理液中浸泡，然后将含有处理液的样品垫(2)置于温度为18-24℃、相对湿度小于40％的环境中烘干16-24h，备用；

B、制备胶体金标记垫(3)：胶体金溶液、抗体标记及胶体金标记垫(3)制备；

C、制备硝酸纤维素膜检测垫(4)：①、按照配方要求配置好质控线(5)、隐孢子虫检测线(8)和贾第鞭毛虫检测线(7)的抗体溶液，且最终抗体溶液浓度为1.0-1.2mg/ml；②取硝酸纤维素膜(规格宽度25mm)，按照距离间隔一次性划出隐孢子虫检测线(8)、贾第鞭毛虫检测线(7)和质控线(5)，划膜时，抗体溶液的消耗量设定为1.0-1.2ul/cm，隐孢子虫检测线(8)包被有鼠抗隐孢子虫单克隆抗体3，贾第鞭毛虫检测线(7)包被有鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体4，质控线(5)包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；

D、贴板及切割：将样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜检测垫(4)和吸水垫(6)顺序搭接PVC底板(1)上，并按照规格要求切割成宽度3.3mm(条型)和4mm(卡型)。

4.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤A中，处理液为样品垫处理液，且处理液由0.5％吐温-20、1％BSA的pH为8.0的1mol/L磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液组成。

5.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，胶体金溶液的制备方法(以制备1000ml为例)包括以下步骤：①、用量筒量取980mL工艺用水到烧瓶中；②、加入制备量1％氯化金溶液，边搅拌边加热至沸腾；③、在搅拌过程中，迅速加入制备量1％柠檬酸三钠溶液；④、颜色变成橙红色后，继续煮沸15min；⑤、关闭搅拌器，让胶体金溶液自然冷却，用工艺用水将胶体金溶液定容至1000mL。

6.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，抗体标记及胶体金标记垫(3)的制备方法(以制备40米胶体金标记垫(3)为例)包括以下步骤：①、最佳pH值的确定：取320ml胶体金溶液，取用0.1M的碳酸钾溶液调整胶体金溶液的pH值至合适pH值；②、将溶液放到磁力搅拌器上，调整转速为250rpm；③搅拌状态下，加入所需量鼠抗隐孢子虫单克隆抗体1和鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体2，这两种抗体在此溶液中的浓度控制在8-10ug/ml；④、静置15min后加入10％BSA，使BSA终浓度为0.1％，加入0.32ml的1％PEG20000，继续搅拌10min；⑤、离心：将标记好的溶液转移到离心管中，天平上调整平衡，并控制温度为2-8℃，转速为10000rpm，离心时间为30min；⑥、小心吸出上清，收集沉淀，用金标结合物稀释液定容到原胶体金溶液体积的10％；⑦、涂布：取聚酯无纺布，设定涂布量为6-8ul/cm，干燥温度为37℃，相对湿度≤40％，转动速度1.5m/min，将涂布好的胶体金标记垫(3)转移到干燥间；⑧、干燥温度为37℃，干燥湿度≤40％，干燥时间为16-24h；⑨、胶体金标记垫(3)干燥后，用铝箔袋封存备用。