[发明专利]可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用

说明书

本发明公开了一种可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用，包括如下步骤：S1、根据各蛋白条带分子量大小设计对应的基因片段，并确定与之对应的表达载体；S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将基因片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化；S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。其制备方法简单、易操作，且制备获得的可曝光预染蛋白marker即是可见的预染蛋白，又是可以发光的发光蛋白，且显现在X胶片上。

技术领域

本发明涉及分子生物学与基因工程领域，尤其是涉及一种可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用。

背景技术

蛋白分子量标准，常称之为蛋白Marker，其作为一种蛋白质分子量大小的标准被广泛应用于蛋白质电泳中。在免疫印迹(Western-blot)实验中，只有Marker精确无误，实验结果才有说服力。除此之外，蛋白Marker还能够提示电泳是否正常，转移是否成功等信息。所以选择正确的蛋白Marker是western-blot实验成功的必要条件之一。

现有的蛋白Marker研发经历了普通Marker、预染Marker和曝光Marker三个发展阶段。其中，普通蛋白Marker由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示分子量大小正好是蛋白原本的大小，在早期可精确判断蛋白大小。但因为电泳过程中完全看不到普通Marker，要和目标蛋白一起最后染色才能看见，无法对实验过程起预示参照作用。

预染Marker是将普通蛋白marker中的每个蛋白(或多肽)经过化学修饰，与一种蓝色或其他颜色的染料共价偶联而成。预染蛋白marker的出现给Western Blot带来了极大便利，研究者在转膜后，可根据膜上蓝色(或其他颜色)蛋白marker的大小来确定目的条带的大概位置，从而对膜进行剪切等处理。但是，预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断，另外预染蛋白Marker经过化学修饰后在SDS-PAGE电泳过程中迁移率发生改变，导致分子量信息不再准确，以致Western Blot结果判断出现较大偏差，所以不太适合精确定位蛋白。

曝光Marker可特异性结合一抗或者二抗，使得最终的Marker条带会和检测目标蛋白会一同出现在显色的图片中，避免将照片和膜进行比对时出现偏差。如申请号为201710707539.4的发明专利申请中公开了一种预染发光蛋白marker的制备方法，其通过将调好的发光蛋白marker与预染蛋白marker按不同的比例混合获得预染发光蛋白marker，但该种方法中发光蛋白marker与预染蛋白marker的比例不定，需根据实际情况调整，使得制备过程变得繁琐。

发明内容

针对上述缺陷，本发明提供了一种可曝光预染蛋白marker及其制备方法、应用，其制备方法简单、易操作，且制备获得的可曝光预染蛋白marker即是可见的预染蛋白，又是可以发光的发光蛋白，且显现在X胶片上。

本发明就上述技术问题而提出的技术方案如下：

一方面，提供了一种可曝光预染蛋白marker的制备方法，其包括如下步骤：

S1、根据预染发光蛋白marker中各蛋白条带分子量大小设计对应的核酸片段，并确定与之对应的表达载体；

S2、预备所述表达载体，并通过PCR扩增获得所述基因片段；将核酸片段连接到与之对应的表达载体上，并转入宿主细胞内进行表达、纯化，以得到与条带对应的不同分子量大小的发光蛋白；

S3、将不同分子量大小的发光蛋白分别与染料混合，以获得不同分子量的预染蛋白；

S4、将不同分子量大小的预染蛋白按预设比例混合，得到可曝光预染蛋白marker。