本发明公开了一种人Cx43基因干扰序列,如SEQ ID NO1所示。还公开了一种人shRNA‑Cx43病毒,为SEQ ID NO1所示的序列构建到表达质粒中。还公开了一种低表达Cx43蛋白的细胞系,为被shRNA‑Cx43病毒感染的软骨细胞。本发明通过分子生物学手段将人Cx43基因干扰片段构建入慢病毒载体的U6启动子下游。实现在干扰目的基因的同时表达绿色荧光蛋白EGFP和puromycin抗性基因,前者便于观察载体工作状态,后者方便筛选目的基因干扰的稳定细胞株。构建的质粒包装慢病毒,用于稳定株的筛选。在软骨细胞中低表达connexin43的稳定细胞系,可用于研究低表达connexin43所引起的相关炎性因子表达量的变化,从而找到有效治疗关节炎的策略。
本发明公开了一种人MMP13基因干扰序列,如SEQ ID NO1所示。还公开了人shRNA‑MMP13病毒,为上述序列构建到表达质粒中。还公开了低表达MMP13蛋白的细胞系,为被上述病毒感染的软骨细胞。本发明以慢病毒为载体构建表达干扰MMP13蛋白表达的shRNA。慢病毒基因组可以整合到宿主基因组中,从而稳定表达外源基因,可在药物压力和荧光蛋白双重条件下筛选,更方便阳性克隆的筛选。在软骨细胞中低表达MMP13的稳定细胞系,可用于研究低表达MMP13引起的相关蛋白表达量变化,从而找出与ONFH发生发展相关的机理,为临床和治疗提供更多的靶点。在细胞水平上研究骨关节炎的病理发生过程,缩短实验周期,更便利地进行科学研究。