[发明专利]一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法

说明书

本发明提供了一种高纯度重组促卵泡刺激素的纯化方法。具体地，包括步骤：(a)提供一含有重组促卵泡激素的原料液；(b)对所述原料液依次进行：(b1)硫酸铵沉淀；(b2)疏水相互作用色谱法(HIC)；(b3)低PH孵育灭活病毒；和(b4)反相色谱层析(RPC)；其中，步骤(b1)、(b2)、(b3)和(b4)不可以以任意次序进行。本发明的重组促卵泡刺激素相比已有的制备方法，简单易操作，并且用本发明的方法得到的重组FSH纯度可高达99.5％w/w，比活性高达16000IU/mg。

技术领域

本发明涉及重组促卵泡刺激素的纯化方法，尤其涉及一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法。

背景技术

促卵泡刺激素(又称卵泡刺激素，Follicle Stimulating Hormone，FSH)是一种异源二聚体糖蛋白，分子量约为31KD，由非共价结合的α亚基和β亚基组成。其中α亚基相对分子质量约14KD；β亚基相对分子质量约17KD，是由垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素,受下丘脑促性腺释放激素控制。对于女性，FSH能促进卵泡颗粒层细胞增生分化，其浓度对卵泡发育的启动和周期，及随后使卵泡达到成熟的时间和卵泡数目均至关重要。对于男性而言，FSH能与受LH(黄体生成素)控制的睾丸素结合，作用于睾丸曲细精管，从而激活并保持正常精子的数目和质量。FSH在不孕不育的诊断和治疗中都是有着重要作用的生物活性分子，在促使卵泡正常生长、成熟和性腺甾体类固醇的产生中均扮演着不可或缺的角色。

由于FSH合成和分泌不足所致的FSH浓度过低是女性和男性不育的主要原因。在女性中，这一状态的特征表现为不排卵或排卵异常；在男性中，可能会由于没有足够量的有活力的精子产生而导致不育。在不孕不育的诊断和治疗中，FSH是发挥着重要作用的生物活性分子，在人类辅助生殖技术中FSH扮演着重要的角色，是目前市场上常见的用于治疗男女不孕症的主要药物之一。

早期取自绝经期妇女尿液制备的尿促性素(亦称为绝经期尿促性腺激素，绝经促性素)，含促卵泡素(FSH)与黄体生成素(LH)，存在着活性低、成本高、污染大及潜在病原微生物感染等缺点。应用DNA重组技术生产的重组人卵泡刺激素(rhFSH)具有标准化的分子量和生物学活性，避免了由尿源提取的FSH在糖基结构上的差异而造成的FSH异构体生物活性上的差异，可以提高产品的质量和产量，同时rhFSH还具有优良的安全特性。

目前，利用DNA重组技术生产的重组人卵泡刺激素(rhFSH)已问世，最早进入商业产品的是瑞士雪兰诺公司的果纳芬GONAL-f○R和荷兰欧加农公司的普丽康Puregon○R。果纳芬和普丽康属于重组人促卵泡生成素，其中促卵泡生成素纯度超过99％，作用稳定，因此具有很大优势。目前中国市场上主要有三种重组人卵泡刺激素和(长春金赛药业股份有限公司生产)。国内的制药公司生产重组FSH的产品，纯度均不超过99％。因FSH在治疗不孕不育，促使卵泡正常生长、成熟和性腺甾体类固醇的产生中所扮演的重要作用，提供高纯度和高比活的重组FSH是有希望的。高纯化的FSH制剂可以通过皮下注射，患者可以自行给药，因此增加了患者的舒适度和依从性。

然而，由于技术力量和经费的原因，重组FSH产品明显比尿源FSH产品更昂贵，一般的患者经济上难以负担。

因此，本领域迫切需要开发一种低成本、易操作、所获得FSH的纯度高、生物活性好的FSH纯化技术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种低成本、易操作、所获得FSH的纯度高、生物活性好的FSH纯化技术。

在本发明中，提供了一种高纯度重组促卵泡刺激素纯化方法，其包括步骤：

(a)提供一含有重组促卵泡激素的原料液；

(b)对所述原料液依次进行：

(b1)硫酸铵沉淀；

(b2)疏水相互作用色谱法(HIC)；