[发明专利]蚯蚓弹力蛋白与蚓激酶的联合制备工艺

权利要求书

1.一种蚯蚓弹力胶原蛋白与蚓激酶的联合制备工艺，其特征在于，包括：

a)冰冻刻蚀

1)低温速冻：排空蚯蚓腹腔杂物后，经清洗干净后置于温度为-45℃下4～8h，得到冻蚯蚓；

2)恒温解冻：将步骤1)得到的冻蚯蚓转移至70～80℃环境下解冻，收集蚯蚓渗出液；

b)逆流悬浮法分离弹性蛋白

将步骤a)中收集完蚯蚓渗出液后剩余的物质经逆流悬浮分离，去除杂质，得到蚯蚓弹性蛋白；逆流悬浮法采用的装置为高：直径＝1：20～ 25的圆柱体；

c)提取蚯蚓弹力胶原蛋白

将步骤b)得到的蚯蚓弹性蛋白中加入去离子水，在80～90℃的水浴锅中保温2h后，真空负压抽滤，得到滤出液，将滤出液脱色得到蚯蚓弹力胶原蛋白液；

d)提取，浓缩蚯蚓弹力胶原蛋白

将步骤c)得到的蚯蚓弹力胶原蛋白液在10000r/min下离心澄清，并将澄清液通过截留分子量6000～100000D的中空纤维柱分级、浓缩，得弹力胶原蛋白浓缩液；

e)将步骤d)得到的弹力胶原蛋白浓缩液在温度为-75℃，压强为10-15Pa条件下冷冻干燥，得到蚯蚓弹力胶原蛋白；

f)提取蚓激酶

将步骤a)收集到的蚯蚓渗出液用0.005mol/L的PBS缓冲液，将蚯蚓渗出液pH值调至7.8后，浓缩5倍，将浓缩液通过阴离子交换纤维素树脂离子交换层析进行分离纯化层析，用0.5-2mol/L的氯化钠对层析后的产物进行阶段洗脱，经脱盐、浓缩、冷冻干燥得到蚓激酶。

2.如权利要求1所述的联合制备工艺，其特征在于，步骤a)，重复步骤1)、步骤2)7～10次，收集、合并蚯蚓渗出液。

3.如权利要求1所述的联合制备工艺，其特征在于，步骤b)中，逆流悬浮中去离子水的温度为4～8℃。

4.如权利要求1所述的联合制备工艺，其特征在于，步骤c)中，蚯蚓弹性蛋白与去离子水的质量比为1：10。

5.如权利要求1所述的联合制备工艺，其特征在于，步骤c)中，采用活性炭和/或阴离子交换纤维素树脂对滤出液进行脱色。