[发明专利]恩夫韦肽的制备方法和应用

说明书

本发明涉及恩夫韦肽技术领域，具体提供一种恩夫韦肽的合成方法和应用。该合成方法包括：以氨基树脂为载体树脂依次与恩夫韦肽第1～25个氨基酸对应的Fmoc‑氨基酸进行偶联反应、酸解，得到多肽片段SEQ ID NO：2；以羧基树脂为载体树脂依次与恩夫韦肽第26～36个氨基酸对应的Fmoc‑氨基酸进行偶联反应并接入乙酰基，酸解，得到多肽片段SEQ ID NO：3；将SEQ ID NO：3与丙酮叉保护的水杨醛进行缩合、脱除保护基，得到多肽片段SEQ ID NO：4；将SEQ ID NO：2与SEQ ID NO：4进行丝氨酸多肽连接，经酸解，得到恩夫韦肽。本合成方法得到的恩夫韦肽具有纯度高、无消旋的特点。

技术领域

本发明属于恩夫韦肽技术领域，尤其涉及一种恩夫韦肽的合成方法和应用。

背景技术

恩夫韦肽是人工合成的由36个氨基酸组成的链状多肽，其主要物理性质如下：白色或灰白色非晶型固体，在纯水中几乎不溶，但在pH＝7.5的缓冲液中溶解度达到82～142g/mL。分子式为C₂₀₄H₃₀₁N₅₁O₆₄，分子量为4492.01，其结构式为：

CH₃CO-Tyr-Thr-Ser-Leu-Ile-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn-Gln-Gln-G lu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Ala-Ser-Leu-Trp-Asn-Trp- Phe-NH₂。

结构序列为：SEQ ID NO:1

Ac-YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF-CONH₂。

2003年3月13日，美国FDA经加快审批，宣布批准恩夫韦肽用于成人及 6岁以上儿童的抗艾滋病治疗。该药由瑞士Roche公司与美国Trimeris公司联合研制开发，其商品名为Fuzeon，原名“T-20”，CAS Number:为159519-65-0。

恩夫韦肽是近年来抗艾滋病治疗药的先锋，是第一个融合抑制剂。其它抗艾滋病药物是作用于细胞内部，阻止病毒在细胞内部复制，而这一药物却是通过阻止病毒与T细胞等免疫细胞的接触融合，干扰HIV-1进入T细胞，防止艾滋病患者的免疫系统遭受病毒破坏来发生作用，因此又称为融合抑制剂。

现有恩夫韦肽制备工艺主要为固相与液相相结合的片段缩合工艺。具体是先使用二氯三苯甲基氯树脂制备每个片段肽树脂，经弱酸酸解，水沉淀过滤后得到保护的肽片段，在通过液相片段缩合，酸解，高效液相色谱纯化得到纯度为93-95％的产品。该方法片段缩合时存在溶解度低，易消旋等问题，每个片段需要纯化，杂质多，不适合规模化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种恩夫韦肽的合成方法，以解决现有恩夫韦肽合成过程中存在的片段溶解度低、易消旋且杂质多，不易纯化等问题。

进一步地，本发明还提供将该恩夫韦肽用于制备融合抑制剂的应用。

本发明是这样实现的：

一种恩夫韦肽的合成方法，包括以下步骤：

步骤S01.以氨基树脂为载体树脂，依次与恩夫韦肽第1个至第25个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸进行偶联反应，得到全保护的多肽片段，酸解得到脱保护基后的多肽片段SEQID NO：2；

步骤S02.以羧基树脂为载体树脂，依次与恩夫韦肽第26个至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸进行偶联反应，偶联反应结束接入乙酰基，酸解切割，得到多肽片段SEQ IDNO：3；

步骤S03.将多肽片段SEQ ID NO：3与丙酮叉保护的水杨醛进行缩合反应，随后酸解脱除保护基，得到多肽片段SEQ ID NO：4；