[发明专利]一种聚糖结合多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种聚糖结合多肽及其制备方法和应用，属于生物制药领域。本发明多肽由22个氨基酸组成，其氨基酸序列SEQ ID No.1所示。本发明多肽利用固相化学合成法合成，产量高，工艺稳定，分子量为2448.8Da。本具有特异与聚糖链结合的活性，可用来设计与糖生物学研究的工具或用来设计相关药物制剂。

技术领域

本发明涉及一种多肽及其应用，特别涉及一种聚糖结合多肽及其制备方法和应用，属于生物制药领域。

背景技术

聚糖是组成机体组织细胞的重要生物大分子之一。除了糖原在细胞内作为葡萄糖储存形式参与能量代谢外，聚糖常与蛋白质、或脂类以共价键结合，以糖蛋白或糖脂的形式分布于细胞表面。因其结构及细胞表面分布这一特征，聚糖具有非常重要的生物学功能，其主要作用是参与细胞表面事件，包括细胞与细胞外基质分子、细胞与细胞之间的识别结合以及对外环境的应答等。因此，聚糖的功能牵涉到机体的胚胎发育、神经发生、肿瘤的转移、免疫反应以及表面抗原如血型抗原的形成等。干预聚糖结构或合成将影响其功能。这也是目前研究聚糖功能或设计相应药物的理论基础。

目前，干预或研究聚糖功能最常用的方法是通过基因敲除技术，抑制相应糖基转移酶的表达。但这一方式只能用来在体外研究聚糖的功能，以目前的技术，远不能应用于临床治疗。再一个方法就是寻找能与聚糖链特异结合的分子，以阻断聚糖链的功能。其中应用最多的是凝集素。凝集素是能与某种特异结构糖链识别结合的蛋白质或糖蛋白。但凝集素是来源于植物或动物的大分子，具有抗原性。另外凝集素具有凝集细胞活性，对机体是毒素，故只能做为糖生物学研究的工具，不能应用于临床治疗。因此，寻找无免疫原性，安全无毒性的、能与聚糖特异结合的分子是这一研究领域的重要内容。

多肽(50个以下氨基酸组成的肽链)具有分子量小、低毒性、高活性、无免疫原性，容易制备等。但目前为止，尚没有发现能与聚糖特异性结合的多肽。

发明内容

在长期从事多肽结构及功能的经验基础上，经反复体外和体内实验，设计出一种能与聚糖特异性结合的多肽。体外实验证明，该多肽可与蛋白结合聚糖和脂结合聚糖特异的识别结合。体内实验安全无毒性。

本发明的目的是基于多肽分子设计理论和固相化学合成技术，提供一种聚糖特异性结合的多肽。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供一种聚糖结合多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明多肽由22个氨基酸组成，分子量为2446.8Da。

本发明还提供所述的多肽在制备干预聚糖结构或合成的药物中的应用。所述制剂可以为本发明所述的多肽，也可以为含有本发明多肽和其他药学上可允许的辅料的制剂。

本发明还提供所述的聚糖结合多肽的制备方法，该多肽用固相化学合成法制备得到，包括以下步骤：

(1)将Fmoc保护氨基酸在2-CL树脂上按预先设计的顺序从C端到N端逐个进行偶合并去除Fmoc保护基，得连接有树脂的多肽链；

(2)将步骤(1)得到的多肽链中加入裂解液，在25～35℃温度下，反应2-4小时，抽滤，滤液经纯化得到多肽粗品；

(3)步骤(2)得到的多肽粗品经纯化，得到多肽纯品。

进一步地，在上述技术方案中，在步骤(1)中所述的将Fmoc保护氨基酸在2-CL-树脂上偶合并去除Fmoc保护基的方法为：称取1g 2-CL树脂放入反应器中，加入10mLDCM，加入4mmol Fmoc保护氨基酸和1mmol DIEA，用氮气鼓泡反应3h，然后加入1mL甲醇和1mL DIEA，反应半小时，抽掉反应液，用DMF、DCM洗净，加入2-4mL哌啶去除Fmoc保护基，得连接有树脂的多肽链。

进一步地，在上述技术方案中，步骤(2)中所述的裂解液为87.5％的TFA水溶液。