[发明专利]一种鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的原核表达、蛋白纯化方法

说明书

本发明首先公开了一种编码鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因的核苷酸序列；然后公开了所述基因编码的鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的氨基酸序列；接着公开了包含所述基因的重组载体，最后公开了一种鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的原核表达、蛋白纯化方法。到目前为止，尚未有人体外表达过鲤疱疹病毒（CyHV‑2）ORF66蛋白，而本发明通过基因工程方法，首次成功表达纯化了鲤疱疹病毒（CyHV‑2）ORF66蛋白。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的基因克隆和原核表达、纯化方法。

背景技术

鲫鱼是我国淡水养殖的常见鱼种，属于鲤形目(Cypriniformes)，鲤科(Cyprinidae)，鲫属(Carassius)。鲫鱼(Crucian carp)饲养成本低,养殖地域广,在中国淡水养鱼上占有重要地位,中国鲫鱼养殖主要集中在东部、中部和南部地区,如江苏、湖北、江西、安徽、山东、广东、四川、辽宁、湖南、浙江等省。据统计，鲫鱼的养殖总产量已达到300多万吨，约占全国淡水鱼总养殖产量的12％。2013年中国鲫鱼年产量达259.44万吨,其中主要养殖品种为异育银鲫(Carassius auratus gibelio)。异育银鲫具有生长快速、抗逆性强、肉质好的优点，深受人们的喜爱。然而，随着养殖规模的逐渐扩大、集约化程度的不断提高，异育银鲫的病害问题日益突出。2012年，江苏省盐城地区养殖的异育银鲫爆发了一种以“鳃出血”为主要症状的疾病，称为鲫造血器官坏死病(俗称“鳃出血病”)。该病具有发病急、传播快、死亡率高的特点，严重威胁我国异育银鲫养殖业发展。研究发现，鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2)是造成鲫造血器官坏死病的病原。

鲤科疱疹病毒II型，又称为疱瘆造血器官坏死病毒(或金鱼造血器官坏死病毒)。该病毒隶属于疱疹病毒目(Herpesvirales)、鱼疱疹病毒科(Alloherpesviridae)、鲤疱疹病毒属 (Cyprinivirus)，CyHV-2与分离自鲤科鱼类的另外两种病毒鲤疱疹毒1(Cyprinidherpesvirus 1, CyHV-1)和鲤疱疹病毒3(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)亲缘关系较近,与沟鲇疱疹病毒 (Ictalurid herpes-virus 1,IcHV-1)关系相对较远。在病原学方面，CyHV-2具有鱼类疱疹病毒的一般特征。病毒呈球形，具有二十面体立体对称的衣壳结构，内部包有长度约为290,304bp 的双股DNA，外面为皮质层和囊膜。现已确认，鱼类疱疹病毒基因组含有12个核心ORF，这些编码蛋白在CyHV-1和CyHV-3中均有分布，主要参与病毒复制、装配以及衣壳的形成等过程。Jung等在1995年对CyHV-2进行了第一次报道，发现CyHV-2是金鱼造血器官坏死病的致病病原。之后在美国、澳大利亚、中国台湾、英国养殖的金鱼也暴发该病。自从 2011年匈牙利首次在养殖的鲫鱼体内检测到CyHV-2后，近几年来关于CyHV-2感染鲫鱼的报道也逐渐增多,该病毒在中国、日本、美国、澳大利亚、英国、新西兰等地广泛传播，造成养殖鲫鱼和金鱼大量死亡。这些报道均表明CyHV-2是一种新生养殖鲫鱼病毒病，其发病区域在逐年扩大。CyHV-2病害已经引起我国水产养殖业管理部门及养殖户高度重视。

发明内容

针对现在技术的不足，本发明第一个目的是提供一株鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因；本发明的第二个目的是提供鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白基因编码的蛋白质；本发明的第三个目的是提供一种鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的原核表达、蛋白纯化方法。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

一株鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

上述鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示相应的，本发明提供包含上述CyHV-2蛋白ORF66基因的重组载体和表达方法。