[发明专利]肝细胞生长因子的重组表达方法

权利要求书

1.一种肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，包括：分别构建表达肝细胞生长因子α链的质粒和表达肝细胞生长因子β链的质粒，将所述表达肝细胞生长因子α链的质粒和表达肝细胞生长因子β链的质粒共转染至哺乳动物细胞中，培养；

所述肝细胞生长因子α链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述肝细胞生长因子β链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述表达肝细胞生长因子α链的质粒上还含有编码信号肽的片段，所述编码信号肽的片段与编码肝细胞生长因子α链的片段依次连接；和/或

所述表达肝细胞生长因子β链的质粒上还含有编码信号肽的片段，所述编码信号肽的片段与编码肝细胞生长因子β链的片段依次连接。

3.根据权利要求2所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述表达肝细胞生长因子α链的质粒的构建方法包括以下步骤：

以含有HGF基因片段的DNA为模板，通过核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的引物扩增，得目的片段A；

将目的片段A与表达载体连接。

4.根据权利要求2所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述表达肝细胞生长因子β链的质粒的构建方法包括以下步骤：

以含有HGF基因片段的DNA为模板，通过核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的引物扩增，得目的片段B；

将目的片段B与表达载体连接。

5.根据权利要求3或4所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述表达载体为pMCX。

6.根据权利要求5所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，相应的目的片段插入在所述表达载体的Not I和BamH I之间。

7.根据权利要求1-4任一项所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞为CHO细胞。

8.根据权利要求1-4任一项所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述培养为：采用无血清培养基，悬浮培养。

9.根据权利要求1-4任一项所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述共转染的步骤包括：将表达肝细胞生长因子α链的质粒和表达肝细胞生长因子β链的质粒混合，得质粒混合物；

将质粒混合物和PEI依次加入至哺乳动物细胞中，所述质粒混合物与所述PEI的质量比为1：(4-6)。

10.根据权利要求9所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述质粒混合物与哺乳动物细胞的比例为(0.4-0.8)μg/10⁶个细胞；和/或

所述PEI与哺乳动物细胞的比例为(2-4)μg/10⁶个细胞。

11.根据权利要求9所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述共转染时使用的培养基为proCH5培养基。

12.根据权利要求11所述的肝细胞生长因子的重组表达方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞在proCH5培养基中的密度为(4-6)×10⁶个细胞/ml。

13.一种宿主细胞，其特征在于，转染或转化有表达肝细胞生长因子α链的质粒和表达肝细胞生长因子β链的质粒；

所述肝细胞生长因子α链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述肝细胞生长因子β链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

14.根据权利要求13所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞采用如权利要求1～12中任一项所述的肝细胞生长因子的重组表达方法中重共转染方法制备得到。