[发明专利]一种外泌体鉴定装置及外泌体鉴定方法

说明书

本发明提出一种外泌体鉴定装置及外泌体鉴定方法，本发明的外泌体鉴定装置小巧，便于携带，并且造价便宜，相比于传统的设备，大大降低了设备的成本；本发明的外泌体鉴定装置可以将加样区内的外泌体样本分散到四周多条检测“臂”内同时进行检测，保证检测结果的准确性，避免由于显色剂失效，造成检测结果的不准确；并且本发明的检测方法检测效率高，过程简单，无需对操作人员进行专业的培训，降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及外泌体鉴定技术领域，尤其涉及一种外泌体鉴定装置及外泌体鉴定方法。

背景技术

细胞外囊泡(Extracellular Vesicles，EVs)是一种细胞间相互通讯的手段，也是进化历史上非常古老的一种细胞间通讯手段，从真核生物到原核生物，都存在基于EVs的信息传递。

外泌体是EVs的一种特殊亚型，来源于内体(endosome)起源的多泡体(Multivesicular bodies，MVBs)，粒径主要分布于30nm-150nm，具有一些特异的标志物，例如：CD63，CD81，ALIX(Apoptosis-Linked Gene 2-Interacting Protein X，细胞凋亡相关基因2相互作用蛋白X)，FLOT1(Flotillin-1，阀蛋白1)，ICAM1(Intercellular adhesionmolecule 1，细胞间黏附分子1)，EpCam(Epithelial cell adhesion molecule，上皮细胞粘附分子)，ANXA5(AnnexinA5，膜联蛋白A5)和TSG101(Tumor susceptibility gene 101，肿瘤易感基因101)。

外泌体近年来研究的越来越多，主要集中在两个方面：疾病标志物、外泌体治疗。

而外泌体分离提取之后，进行进一步检测或者作为治疗药物使用之前，需要质量控制，确定我们收集的样本就是外泌体，且无来自细胞碎片的污染。这样的外泌体才有作为疾病标志物的价值，这样的外泌体用于外泌体治疗才能保证有效性和安全性。

质量控制常规的方法包括纳米颗粒跟踪分析(NTA)、动态光散射、透射电镜、免疫电镜、WesternBlot、免疫流式、ELISA等方法。NTA和动态光散射相对而言比较简单，但仅仅评估了粒径大小分布情况，对于外泌体鉴定的意义有限，且需要复杂的仪器设备，从实验室推广到临床使用较为困难。透射电镜可以观察外泌体形态，是一种相对较好的鉴定方法，但是费时费力，而且依赖大型仪器(电子显微镜)，也很难完成从实验室向临床的推广。

基于免疫的方法，是可以测定外泌体中富集的蛋白(CD63,CD81,ALIX,FLOT1,ICAM1,EpCam,ANXA5和TSG101)的含量来判断获取的样本是否为外泌体。并且还可以测定在外泌体中不存在，而在细胞碎片中存在的蛋白[GM130(130KDa Cis-Golgi MatrixProtein，130KDa顺式高尔基体基质蛋白)]的含量，来判断获取的样本中是否存在碎裂的细胞产生的污染组分。因此基于免疫学的方法，是可以比较准确和可靠的评估外泌体样本质量的手段。但传统的基于免疫的鉴定方法，对于外泌体量的要求较多，临床使用中，提取出来的外泌体很宝贵，能用尽量少的样本进行鉴定是最好的。

但是传统的基于免疫的方法，免疫电镜依然存在依赖大型仪器的缺点，难以从实验室推广到临床。Western Blot虽然不需要大型仪器，但操作复杂，依然是很费时费力的方法，难以满足临床需求。免疫流式也依赖于大型仪器(流式检测仪器)。ELISA虽然比WesternBlot简单，但也依然相对而言费时费力。最终产品推广到临床上大量使用时，配备大量具有专业知识的操作人员是不现实的，必须要做到操作简单，操作人员只需要经过简单的培训便可掌握。

发明内容

本发明的目的在于提出一种检测快捷、样本需要量少并且设备小的外泌体鉴定装置及外泌体鉴定方法。