[发明专利]一种5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色谱检测方法

说明书

本发明涉及高效液相色谱检测技术领域，公开了一种5‑氨基‑1H‑1，2，4‑三氮唑‑3‑羧酸的高效液相色谱检测方法，包括：1）称取5‑氨基‑1H‑1，2，4‑三氮唑‑3‑羧酸样品并将其添加至硫酸水溶液中，超声震荡，使样品溶解至无色透明，得到样品溶液；2）取样品溶液用流动相稀释定容，超声处理；所述流动相为0.18‑0.22wt%的戊烷磺酸钠溶液和乙腈的混合溶液；3)对步骤3）所得溶液自动进样，进行高效液相色谱检测，获得结果。本发明采用高效液相色谱法对产品进行定量检测，具有灵敏度高、快速分离、准确定量，分离度良好、检测时间短等优点，克服了滴定分析不准确的缺点，所得到的峰形好，样品线性好。

技术领域

本发明涉及高效液相色谱检测技术领域，尤其涉及一种5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3- 羧酸的高效液相色谱检测方法。

背景技术

5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸是合成抗病毒药物利巴韦林的一个重要的中间体。目前国内对其含量的主要分析方法有以下几种：

(1)针对其氨基采用高氯酸滴定法。其步骤和原理为：

步骤：精确称取5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸0.1g，加冰乙酸30mL，加热回流至溶解，冷却到室温。加α-萘酚苯甲醇指示剂2滴，用0.1mol/L高氯酸滴定至显绿色即为终点。同时做空白校对。(每1mL高氯酸相当于12.8mg环合物)。

原理：产品中含有氨基和羧基，溶解在冰乙酸中时显示碱性较多，可以用高氯酸滴定检测含量。

(2)针对其羧基采用的盐酸的滴定法。其步骤和原理为：

步骤：称取样品置于烧杯中，用移液管移取氢氧化钠标准溶液，加热使之完全溶解，静置 45min，加入酚酞指示剂，用0.1mol/L的盐酸溶液滴定至红色褪去，记录数据，同时做空白试验，同时记录消耗盐酸的体积。

原理：产品中含有羧基，利用酸碱中和的原理。

总体来说，由于5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸难以溶于大部分的溶剂，所以现有技术中都采用了滴定的方法。但由于滴定试剂准确度和5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸中影响滴定的杂质基团的影响，造成含量或多或少存在偏差影响后续产品的质量控制。因此有必要开发出一种精准性更好的新检测方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色谱检测方法，本发明采用高效液相色谱法对产品进行定量检测，具有灵敏度高、快速分离、准确定量，分离度良好、检测时间短等优点，克服了滴定分析不准确的缺点，所得到的峰形好，样品线性好。

本发明的具体技术方案为：一种5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：

1)称取5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸样品并将其添加至硫酸水溶液中，超声震荡，使样品溶解至无色透明，得到样品溶液。

2)取样品溶液用流动相稀释定容，超声处理；所述流动相为0.18-0.22wt％的戊烷磺酸钠溶液和乙腈的混合溶液。

3)对步骤3)所得溶液自动进样，进行高效液相色谱检测，获得结果。

本发明首先对样品进行衍生化，然后再进行高效液相色谱，在特定的检测条件下，本发明方法的可重复性好，保证了产品的准确定性定量。

本发明衍生化的原理为利用硫酸将产品制成硫酸盐，使其易溶于以水相为主的流动相中，其他含有氨基的杂质也可以生成硫酸盐，在色谱柱内进行分离。