[发明专利]一种基于金结合多肽标签功能化胰蛋白酶的微生物诊断传感器有效
申请号: | 201910656506.0 | 申请日: | 2019-07-19 |
公开(公告)号: | CN110408676B | 公开(公告)日: | 2023-04-25 |
发明(设计)人: | 万逸;宋凤阁;葛晓林 | 申请(专利权)人: | 海南大学 |
主分类号: | C12Q1/37 | 分类号: | C12Q1/37;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;G01N33/48 |
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地址: | 570228 海南省*** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 结合 多肽 标签 功能 胰蛋白酶 微生物 诊断 传感器 | ||
1.金结合多肽标签功能化胰蛋白酶在制备微生物检测传感器中的应用,其特征在于:
所述传感器将金结合多肽标签功能化胰蛋白酶的信号放大系统和膜片钳放大器pA电流计相结合;
所述信号放大系统包括检测探针和捕获探针;
所述金结合多肽标签功能化胰蛋白酶是带有金结合多肽标签(GBP)的重组胰蛋白酶;
所述检测探针与所述金结合多肽标签功能化胰蛋白酶结合到纳米金上形成微生物检测用金纳米探针;
所述捕获探针固定于磁珠上形成微生物捕获探针功能化磁珠;
用所述微生物捕获探针功能化磁珠捕获微生物靶核酸,并与所述微生物检测用金纳米探针杂交形成“三明治结构”,清洗后,取构建的所述“三明治结构”激活气溶素原为气溶素,从而在pA电流计的脂质层上形成靶核酸浓度依赖性的电流。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述带有金结合多肽标签(GBP)的重组胰蛋白酶首先由真核表达质粒pGAPZαA-trypsinogen在酵母细胞系GS115中组成表达;经过蛋白纯化和肠激酶充分激活后成为有活性的带有金结合多肽标签的重组胰蛋白酶。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述金结合多肽标签(GBP)的重组胰蛋白酶可替换为GBP-胃蛋白酶、GBP-噬热菌蛋白酶或GBP-弗林蛋白酶。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述胰蛋白酶为猪来源的胰蛋白酶、牛来源的胰蛋白酶、羊来源的胰蛋白酶或人来源的胰蛋白酶。
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